高效液相色谱鉴别糖胺聚糖种类方法的建立及其应用

发布时间：2016-08-10 06:12

  本文关键词：高效液相色谱鉴别糖胺聚糖种类方法的建立及其应用，由笔耕文化传播整理发布。

《中国海洋大学》 2014年

高效液相色谱鉴别糖胺聚糖种类方法的建立及其应用

祝贺  

【摘要】：本文利用反相高效液相色谱法建立了糖胺聚糖(glycosaminoglycans, GAGs)种类的鉴别方法。根据糖胺聚糖及其衍生物不同结构类型的单糖组成不同，采用柱前衍生反相高效液相色谱法(reversed phase-high performance liquidchromatography, RP-HPLC)实现了甘露糖(mannose, Man)、葡萄糖胺(glucosamine, GlcN)、甘露糖胺(mannosamine, ManN)、半乳糖胺(galactosamine,GalN)、葡萄糖醛酸(glucouronic acid, GlcA)、艾杜糖醛酸(iduronic acid, IdoA)、半乳糖醛酸(galacturonic acid, GalA)、葡萄糖(glucose, Glc)、半乳糖(galactose,Gal)和木糖(xylose, Xyl)单糖标准品混合物在C18柱上的有效分离；利用不同类型糖胺聚糖不完全酸水解产物中耐酸水解二糖结构不同，，实现了对肝素/硫酸乙酰肝素(heparin/heparan sulfate, Hp/HS)、硫酸软骨素/硫酸皮肤素(chondroitinsulfate/dermatan sulfate, CS/DS)和透明质酸(hyaluronic acid, HA)的鉴别。所建立的方法成功用于依诺肝素钠中GlcN和ManN摩尔比及海洋鱼鳃组织中杂合硫酸软骨素的分析测定，为低分子肝素的质量控制和海洋生物中复杂GAGs的结构类型鉴别提供了新的途径。 本文第一部分应用RP-HPLC建立了GAGs种类鉴别方法。首先，在实验室前期工作的基础上，对柱前衍生RP-HPLC方法的分离条件进行了优化，确定了适于Man、GlcN、ManN、GalN、GlcA、IdoA、GalA、Glc、Gal和Xyl单糖标准品同时分离的最佳条件，即在柱温30℃和流速1.0mL/min下，以流动相0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.0)–乙腈先在85:15(v: v)下洗脱25min，再在83:17比例下洗脱25min。该方法从单糖组成的角度实现了对不同种类GAGs的鉴别。在此基础之上，对GAGs不完全酸水解产物进行分析，发现了可以同时区分Hp/HS、CS/DS和HA的耐酸水解组分，经质谱和高效阴离子交换色谱分析，确定这三类耐酸水解组分的结构分别为GlcNα1→4IdoA/GlcA、GlcAβ/IdoAα1→3GalN和GlcAβ1→3GlcN。这三类结构不同的二糖可用于Hp、CS和HA的定量分析，其检测限可达纳克级。 本文第二部分应用建立的RP-HPLC方法测定了依诺肝素中GlcN和ManN的摩尔比。首先，通过分子排阻-多角度激光散射联用法、强阴离子交换-高效液相色谱法和核磁共振波谱法分别对8种不同依诺肝素进行了结构分析，结果表明8种依诺肝素均符合USP35标准。在此基础上，通过优化GlcN和ManN降解时间准确测定了二者的摩尔比，初步确定依诺肝素中GlcN和ManN摩尔比的合理范围为16.4～19.1。 本文第三部分利用已建立的RP-HPLC方法鉴定了海洋鱼鳃组织中的杂合硫酸软骨素，并采用二糖组成分析法、聚丙烯凝胶电泳法和核磁共振波谱法对已鉴定的杂合硫酸软骨素进行了结构验证。结果表明本文建立的RP-HPLC方法对鱼鳃组织中的杂合硫酸软骨素结构的鉴定是正确可靠的，这些杂合硫酸软骨素主要由→4GlcAβ1→3GlcNAc4Sβ1→(CSA)、4GlcAβ1→3GlcNAc6Sβ1→(CSC)和→4IdoAα1→3GlcNAc4Sβ1→(DS)重复结构单元共价杂合组成，且DS重复单元的含量在3.9～24.6%之间。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R284;O657.72
【目录】：

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1 张真庆;于广利;赵峡;李倩;管华诗;;几种糖醛酸及其寡糖的薄层层析分析[J];分析化学;2005年12期

2 王金霞;赵峡;于广利;李广生;郝翠;;柱前衍生高效液相色谱法分析海洋褐藻多糖药物的糖醛酸组成[J];分析化学;2009年05期

3 赵峡;李广生;于广利;王金霞;王皓;孙淑萌;郑晨;;问题肝素中多硫酸软骨素杂质的柱前衍生高效液相色谱分析[J];高等学校化学学报;2010年03期

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6 ;How does Cellular Heparan Sulfate Function in Viral Pathogenicity?[J];Biomedical and Environmental Sciences;2011年01期

7 宋玉娟;韩春霞;范慧红;;SEC/MALLS法测定肝素钠及其类似物的绝对分子质量及分布[J];药物分析杂志;2010年04期

8 魏远安,方积年;高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量[J];药学学报;1989年07期

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1 王雪梅;汪莹莹;吴迷迷;张秀珍;;黄蜀葵多糖的分子质量测定及单糖组成分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2011年03期

2 陈彦,谢继锋,金先菊,路国伟;海藻多糖的分离纯化和组成分析[J];安徽农业科学;2003年05期

3 袁秀丽;吕嘉枥;肖静;马强;;昆布多糖的研究进展[J];安徽农业科学;2010年27期

4 芮海云,吴国荣,陈景耀,陆长梅;白芨中性杂多糖的分离纯化与结构分析[J];安徽农业大学学报;2004年01期

5 吴向美,屠鹏飞;肉苁蓉多糖CDP-4的化学结构研究[J];北京大学学报(医学版);2004年01期

6 汪东风,李俊,王常红,赵贵文,金涌,陈玎玎,叶盛;茶叶多糖的组成及免疫活性研究[J];茶叶科学;2000年01期

7 王莹莹;何智健;李祥;;明党参多糖的提取分离及结构分析Ⅱ[J];长春中医药大学学报;2007年06期

8 魏江洲;张建鹏;刘军华;王顺春;冯伟华;焦炳华;;海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化[J];第二军医大学学报;2006年01期

9 林宏;施松善;王顺春;;铁皮石斛原球茎多糖D-02C的结构特征及其抗补体活性[J];福建中医药;2012年03期

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2 陈向涛;;中药活性多糖研究与展望[A];'2008临床中药学学术研讨会论文集[C];2008年

3 张思巨;张淑运;扈继萍;;锁阳多糖的研究[A];2002中药研究论文集[C];2002年

4 崔宏春;余继忠;张建勇;周铁锋;;茶多糖检测方法研究进展[A];第十六届中国科协年会——分12茶学青年科学家论坛论文集[C];2014年

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1 任舒文;几种海洋特征寡糖—胶原蛋白复配物对紫外辐射损伤的保护作用及机制研究[D];中国海洋大学;2010年

2 龚志华;茯苓辐照降解及其产物生物活性研究[D];湖南农业大学;2010年

3 李健军;柑橘果胶多糖可控性降解和寡糖片段的分离分析及其活性研究[D];西北大学;2011年

4 聂永心;黄伞子实体多糖的分离纯化、结构鉴定及生物活性的研究[D];山东农业大学;2011年

5 蔡泉源;壳聚糖及透明质酸的电化学降解研究[D];南京理工大学;2011年

6 张小锐;枸杞多糖LBPF4-OL免疫调节靶细胞及其作用位点研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

7 李伟;白术的有效物质及质量研究[D];南京中医药大学;2001年

8 陈洪亮;植物多糖的制备及对肉仔鸡免疫功能影响的研究[D];中国农业科学院;2002年

9 李八方;羊栖菜功能多糖化学及其生物活性研究[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2003年

10 杨兴斌;当归多糖的组成分析及其激活腹腔巨噬细胞的免疫机制[D];第四军医大学;2004年

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1 嵇国利;刺松藻（Codium fragile (Suringar) Hariot）多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究[D];中国海洋大学;2010年

2 胡艳南;海萝藻（Gloiopeltis furcata）多糖的提取分离及其结构研究[D];中国海洋大学;2010年

3 文松松;章鱼（Octopus）多糖的提取分离及结构研究[D];中国海洋大学;2010年

4 刘洪霞;粪鬼伞菌丝体多糖的分离纯化、结构分析和对S-180肿瘤的抑制作用研究[D];长春工业大学;2010年

5 印小燕;太湖水华蓝藻中水溶性多糖的分离纯化[D];江南大学;2011年

6 王博;枸杞糖复合物LbGp4的降解及其活性寡糖片断的初步探究[D];西北大学;2011年

7 黄雪芳;龙眼肉多糖硫酸酯化修饰及修饰前后体外抗肿瘤活性初步研究[D];广西医科大学;2011年

8 李迎雪;MeJA对猴头5L0433菌株麦角甾醇合成的影响及消减文库的ESTs分析[D];东北林业大学;2011年

9 顾岩;大蒜不同脱臭方法及脱臭蒜汁抑菌效果的研究[D];吉林农业大学;2011年

10 赵建志;牛蒡寡糖的修饰及其生物活性研究[D];山东轻工业学院;2011年

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1 杨兴斌,赵燕,周四元,刘莉,王海芳,梅其炳;柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成[J];分析化学;2005年09期

2 张真庆;于广利;赵峡;李倩;管华诗;;几种糖醛酸及其寡糖的薄层层析分析[J];分析化学;2005年12期

3 王莹,于广利,赵峡,管华诗,杜宇国;几种寡聚古罗糖醛酸的制备和结构表征[J];高等学校化学学报;2005年01期

4 熊双丽,金征宇;硫酸化糖胺聚糖的简易分光光度测定法[J];光谱实验室;2005年06期

5 郭连城,张俊杰,崔志强,王富平,施范卿;盐藻粉及盐藻粉软胶囊的研究开发[J];海湖盐与化工;2003年02期

6 于广利,王群,管华诗,徐家敏,Robert J.Linhardt;牛肺肝素寡糖的制备[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2002年02期

7 尹鸿萍;盛玉青;;盐藻多糖体内抑菌及抗炎作用的研究[J];中国生化药物杂志;2006年06期

8 吕惠中;于广利;赵峡;张峥;;猪肝组织中硫酸乙酰肝素的分离纯化及二糖组成分析[J];中国生化药物杂志;2007年05期

9 何红梅,王莹,杜宇国,于广利;具有免疫调节活性的果胶类物质[J];生命的化学;2004年03期

10 田志强;姬胜利;;糖胺聚糖与炎症的关系[J];生命的化学;2005年06期

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