一次性和三重脑震荡鼠惊跳反射弱刺激抑制和谷氨酸脱羧酶变化研究

发布时间：2018-11-20 04:30

【摘要】： 第一部分一次性和三重脑震荡鼠惊跳反射弱刺激抑制变化研究目的:运用惊跳反射弱刺激抑制(prepulse inhibition of the acoustic startleresponse,PPI)实验比较研究一次性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)与多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)大鼠的感觉门控变化情况,以探讨MCC的认知损伤的积累效应。方法:用金属单摆闭合性脑损伤打击装置复制大鼠PCC和MCC模型,检测脑震荡(cerebral concussion,CC)后大鼠在惊刺激诱发的惊吓反射波幅(p值)、前置刺激诱发的反射波幅(pp值)及惊跳反射弱刺激抑制PPI变化情况。结果:PCC大鼠打击24小时内p值、pp值降低(P＜0.05),至伤后16天后接近或恢复正常;MCC打击后24小时内p值、pp值降低(P＜0.05),至伤后28天仍未恢复。CC后PPI与正常对照组相比没有明显差异性(P＞0.05)。结论:1.采用金属单摆式机械打击装置能成功建立PCC和MCC大鼠模型且此模型稳定性高,重复性强。2.大鼠感觉门控在CC后受损,随着CC次数增加,损伤持续时间也增加。第二部分一次性和三重脑震荡鼠谷氨酸脱羧酶67变化研究目的:建立PCC和MCC大鼠模型,通过谷氨酸脱羧酶(glutamic aciddecarboxylase,GAD67)的变化规律,观察PCC、MCC大鼠大脑γ-氨基丁酸(Gamma-amino butyric acid,GABA)能神经元、神经纤维变化的规律。进一步探讨CC大鼠认知行为障碍的神经生物学基础。并探讨PCC和MCC是否有损伤积累效应。方法:用自制金属单摆式闭合性脑损伤打击装置复制PCC和?MCC大鼠模型96只,随机分为PCC大鼠伤后1d、2d、4d、8d、16d、24d和MCC大鼠1d、2d、4d、8d、16d、24d(n=6)十二个实验组,另设一正常对照组(n=6)。运用抗GAD67抗体进行免疫组化染色,用图像分析系统测定扣带回皮质分子层(cg11)、扣带回皮质外锥体层(cg13)、第一躯体感觉皮质分子层(S1ULp1)、第一躯体感觉皮质外锥体层(S1ULp3)、第一躯体感觉皮质内锥体层(S1ULp5)、梨状皮质(Pir)、内侧隔核(MS)、尾壳核近脑室处(CPU1)、尾壳核远离脑室处(CPU2)、伏隔核(Acb)、压部后颗粒细胞b皮质分子层(RSGb1)、压部后颗粒细胞b皮质分子层(RSGb3)、第一感觉皮质分子层(S1BF1)、第一感觉皮质分子层(S1BF3)、第一感觉皮质分子层(S1BF5)、杏仁核(Aco)、海马CA1-3、齿状回下支(DG1)、齿状回上支(DG2)、丘脑网状核(Rt)和下丘脑腹内侧核(VMH)等23个脑区GAD67阳性表达物的光密度值,并测定前额叶皮质、顶叶皮质和丘脑网状核阳性细胞数。结果:(1)GAD67阳性表达物可在鼠脑广泛的神经元内表达。GAD67阳性细胞主要分布在大脑皮质、丘脑网状结构等部位,GAD67阳性纤维在脑内分布广泛。CC后大鼠GAD67阳性表达物呈现先下降后升高的趋势。(2)PCC大鼠中隔断面GAD67光密度:cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、CPU2、Acb等脑区GAD67光密度在伤后1天降低最为明显:S1ULp5、Pir、MS、CPU1等脑区GAD67光密度在伤后8天降低最为明显。(3)MCC大鼠中隔断面GAD67光密度:CPU1、CPU2、Acb等脑区GAD67光密度在伤后2d降低最为明显;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5、Pir、MS等脑区GAD67光密度在伤后4d降低最为明显。(4)PCC大鼠海马断面GAD67光密度:CA2、CA3、DG1、DG2等脑区GAD67光密度在伤后1d降低最为明显;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5、Aco、CA1、Rt等脑区GAD67光密度在伤后8天降低最为明显;VMH脑区GAD67光密度在伤后16d降低最为明显。(5)MCC大鼠海马断面GAD67光密度:Aco、CA1-3、DG1、DG2、Rt、VMH等脑区GAD67光密度在伤后4d降为最低;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5等脑区GAD67光密度在伤后24d降低最为明显。(6)大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在脑震荡后明显减少,然后逐渐增加至伤后24d组基本正常且MCC降低比PCC降低明显。前额叶皮质(PFC)GAD67阳性细胞数:PCC组大脑皮质GAD67阳性细胞数在16d降为最低;MCC组大脑皮质GAD67阳性细胞低谷期在8d。顶叶皮质GAD67阳性细胞数:PCC组大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在8d降为最低;MCC组大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在4d降为最低。结论:(1)GAD67阳性细胞和阳性纤维在大鼠脑内广泛分布。GAD67阳性细胞主要分布在大脑皮质、丘脑网状结构等部位。大鼠GAD67神经元数目呈现下降趋势,且MCC比PCC要重。(2)CC后,大鼠大脑皮质、CPu、Acb、Pir、MS、CA、DG、Rt、VMH等脑区GAD67阳性表达出现不同程度的下降,PCC中隔断面以1d和8d为重,海马断面以1d和8d为重;MCC中隔断面和海马断面以伤后4d和24d为重。提示GAD67的伤后变化可能参与了CC后的认知障碍,且这种变化与PPI变化相一致。
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【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R651.15;D919.1

【参考文献】