MtDNA SNPs复合检测体系建立及法医学应用研究

发布时间：2021-01-18 05:34

　　生物性检材易受外来环境等因素干扰,一直是困扰法医生物痕迹学专家们的难点问题,如腐败组织、陈旧骨骼等,因检材的降解,使DNA序列的完整性受到破坏,影响鉴定结论的得出。目前国内外法医学实验室应用最为广泛的STR检测系统,通常适用于常规检材,但对微量DNA检材、降解检材、无核检材等则常常因等位基因丢失、非特异性扩增、或扩增不出检测片段,导致检测失败,至今法医生物痕迹学（法医物证）领域尚未完全解决这一难题。人类线粒体DNA （mitochondrial DNA, mtDNA）是位于细胞核以外的唯一基因组DNA,主要遵循母系遗传,母亲和子女、兄弟姐妹之间的mtDNA在理论上是一致的,个体唯一的mtDNA不存在。mtDNA是由一万六千多个碱基对组成的环状闭合共价双链分子,外有被膜包围,这样的特性使其在外界环境中不易受到核酸外切酶的影响。每个细胞核DNA只有两个拷贝,而每个细胞的mtDNA有成千上万个拷贝,突变率是核DNA的5～10倍,但在外界环境中更易保存下来,扩增时拷贝数更高,对于考古、大型灾难调查、亲缘关系认定、核DNA分型失败的法医学检材等,mtDNA遗传标记具有良好的应用前景。单核苷酸多态... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：104 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

GenescanTM一120LIZTM电泳图谱

离编辑hins，用于分析电泳结果的基因型。孙论200时认为是阳性信号，可判读基因型。图2一 1GenescanTM一120LIZTM电泳图谱FigZ一 1Eleetrophorogram。 roeneseanTM一 120LlzTMsizestandard

引物与模板互补的序列到其3’端的距离不超过30核昔酸，如果所需引物的总长度超过30个单核昔酸，则通过在sBE引物5’端加入不同长度的 poly-T[29J/Poly-C124]调整(图2一6)。根据选择位点的碱基变异类型进行设计延伸引物，如一位点为“刀C，，突变，另一位点为‘℃厅”突变，用相同或相近长度的单碱基延伸引物同时检测两个位点的两种多态性，在4一6个碱基的间隔范围内检测更多SNPs位点。当利用正义链无法设计出理想的正向引物，可根据反义链设计反向引物，检测的变异类型与报道的互补。引物由大连宝生物公司合成，引物为PAGE纯化。各位点单碱基延伸引物见表2一2所示:

【参考文献】：
期刊论文
[1]潍坊地区11个mtSNP位点单倍型频率调查[J]. 王新杰,罗莉静,许欣,魏金叶.  法医学杂志. 2008(04)
[2]应用mAPLP方法分析湖南汉族、苗族和土家族mtDNA编码区多态性[J]. 周海燕,倪斌,邹永华,张蕊,陈勇.  遗传. 2008(06)
[3]正交实验法在PCR反应条件优化中的应用[J]. 杨水云,李续娥,吴明宇,孙飞龙,李剑君.  生物数学学报. 2005(02)
[4]影响多重PCR扩增效果的因素[J]. 黄银花,胡晓湘,徐慰倬,高宇,冯继东,孙汉,李宁.  遗传. 2003(01)
[5]用SnaP Shot的方法对线粒体7146位点进行基因分型[J]. 柯玉雄,卫灿东,金建中,金力.  复旦学报(自然科学版). 2002(06)
[6]过量DMSO显著降低低模板浓度PCR扩增的特异性[J]. 肖志壮,曲音波,汪天虹,高培基,刘梦海.  遗传. 2001(04)
[7]DMSO对PCR扩增反应的影响[J]. 徐葵,邱志明,汪晓英.  昆明医学院学报. 2001(01)
[8]PCR反应条件的优化[J]. 袁长青,李平,李君文.  中国公共卫生. 1999(03)
[9]提高PCR扩增大DNA片段的特异性和产量[J]. 卢一凡,邓继先,肖成祖,马清钧.  遗传. 1996(05)

博士论文
[1]微测序法检测Y-SNP和mt-SNP的研究[D]. 杜宏.四川大学 2006



本文编号：2984377