C-jun基因与caspase-8基因在海洛因致小脑颗粒神经元细胞凋亡中的作用机制研究

发布时间：2017-05-11 04:01

  本文关键词：C-jun基因与caspase-8基因在海洛因致小脑颗粒神经元细胞凋亡中的作用机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究c-jun基因和caspase-8基因在海洛因诱导小脑颗粒神经元细胞发生凋亡中的作用及意义。方法:离体培养原代小脑颗粒神经元细胞,采用Hoechst 33258核染色观察海洛因在同一时间不同浓度及同一浓度不同时间点下对小脑颗粒神经元细胞核形态的影响。将人工合成沉默c-jun基因的miRNA干扰载体病毒转染至小脑颗粒细胞72 h,以浓度为80 ug/ml的海洛因作用于小脑颗粒细胞24 h,实验分3组:对照组、海洛因组、海洛因+慢病毒组,用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,并采用免疫荧光技术对各组细胞中的c-jun蛋白和caspase-8蛋白荧光强度的表达情况进行检测。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测各组细胞中的c-jun mRNA和caspase-8 mRNA的相对表达量,蛋白印迹(Western blot)法检测p-c-jun、c-jun和caspase-8因子在各组细胞中蛋白水平上的相对表达量。结果:随着海洛因作用小脑颗粒细胞的浓度增加和时间延长,神经元细胞凋亡数量逐渐增加,差异具有统计学意义(P浓度=0.006,P时间=0.005)。C-jun基因表达沉默后,海洛因干预小脑颗粒神经元细胞24h,海洛因组细胞凋亡率为46.50±4.39%,明显高于海洛因+慢病毒组细胞凋亡率(6.06±3.31%)和对照组细胞凋亡率(7.93±3.68%),差异具有统计学意义(P=0.012,P=0.009)(P0.05)。免疫荧光检测发现,80ug/ml的海洛因作用小脑颗粒神经元细胞24 h后c-jun蛋白呈现高表达状态,与对照组和海洛因+慢病毒组相比结果具有差异性(P=0.041,P=0.010),结果显示有统计学意义(P0.05);Caspase-8蛋白在海洛因组高表达,较对照组和海洛因+慢病毒组明显增高,结果具有差异性(P=0.027,P=0.018),有统计学意义(P0.05)。通过qRT-PCR检测3组中c-jun和caspase-8两因子的mRNA水平表达量结果显示:海洛因组与正常对照组相比,c-jun和caspase-8 mRNA相对表达量明显增高(P=0.007,p=0.036),和海洛因+慢病毒组的相对表达量比较,结果有差异(P=0.001,P=0.017),有统计学意义(P0.05);另外海洛因+慢病毒组与对照组进行比较发现,c-jun的mRNA水平表达量降低明显,结果有统计学意义(P=0.006),caspase-8 mRNA水平表达量在海洛因+慢病毒和对照组两组比较无明显差异,无统计学意义(P=0.088)。采用Western blot法检测了海洛因组中的3个蛋白,p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平表达量,结果较对照组明显增高,差异有统计学意义(P=0.018,P=0.013,P=0.017);较海洛因+慢病毒组(P=0.002,P=0.002,P=0.004)蛋白相对表达量亦明显增高,差异有统计学意义(P0.05);海洛因+慢病毒组与对照组中的p-c-jun,c-jun和caspase-8蛋白水平相对表达量明显降低(P=0.005,P=0.007,P=0.027),差异有统计学意义(P0.05)。结论:海洛因致小脑颗粒神经元细胞凋亡比率随海洛因浓度和作用时间的增加而上升,海洛因致CGC细胞凋亡呈时间和浓度正比例依赖关系。C-jun、caspase-8蛋白参与促进了海洛因致小脑颗粒神经元细胞凋亡,同时caspase-8蛋白是重要的c-jun转录信号通路的促凋亡候选靶基因。
【关键词】：海洛因绵状白质脑病 海洛因 凋亡 c-jun caspase-8
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.64;D919

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本文编号：356165