急性乙醇中毒对大鼠海马形态影响的激光扫描共聚焦显微镜观察

发布时间：2017-05-26 12:04

  本文关键词：急性乙醇中毒对大鼠海马形态影响的激光扫描共聚焦显微镜观察，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的:乙醇作为中枢神经系统的抑制剂,可抑制大脑皮层的活动,使皮质下中枢的兴奋失去控制,从而诱发脑功能紊乱,导致机体神经行为功能的改变,造成学习、记忆认知、运动协调等多种行为功能障碍。因此乙醇的过量饮用可严重影响醉酒者的身心健康,导致交通事故、家庭社会暴力等一系列不良后果,给社会和家庭带来极大的危害。但目前国内外研究多集中在慢性乙醇中毒对中枢神经系统带来的不良影响,对急性乙醇中毒的研究报道较少。本研究选取大鼠给予不同剂量的乙醇灌胃后建立急性乙醇中毒动物模型,采用HE染色及免疫荧光法结合激光共聚焦观察乙醇中毒后海马形态结构的变化情况,探讨急性乙醇中毒所致病变基础及其可能作用机制,为今后的相关研究提供科学依据。方法:1.SD大鼠,雌雄不限,体重250g左右,随机分组,酒精浓度为56%(v/v)(红星二锅头)2.分为四个剂量组:对照组、低剂量(4ml/kg)、中剂量组(8ml/kg)、高剂量组(16ml/kg)。分别处理1h、2h、4h、8h、12h。对照组给予相应体积的生理盐水,制作低、中、高剂量急性乙醇中毒模型。3.采用HE染色法观察急性乙醇中毒后海马形态的变化情况4.采用免疫荧光法观察不同时间段急性乙醇中毒后海马神经元Neu N的表达5.利用激光共聚焦观察不同时间段急性乙醇中毒后经过荧光双染的Neu N及DAPI的海马神经元表达结果:1.HE染色结果显示,给予大鼠不同浓度乙醇灌胃后,与对照组相比,乙醇组中齿状回神经元的胞体厚度未发生明显的变化,但其神经元细胞的排布却表现为不同程度的改变。大鼠给予4 ml/kg乙醇灌胃1 h及2 h后齿状回神经元细胞并未发生明显的改变,作用4 h后可见齿状回内颗粒细胞排布呈现轻微的疏松状,作用至8 h时,颗粒细胞的排布已恢复至正常结构;8 ml/kg和16 ml/kg乙醇处理组可见部分齿状回颗粒细胞胞体出现明显水肿,给予大鼠乙醇灌胃2 h后,8 ml/kg乙醇处理组与对照组相比无明显差别,4 h时可见齿状回神经元细胞出现明显排列紊乱、疏松,细胞间隙增大,8 h时其细胞排布结构逐渐恢复至正常状态,至12 h时,齿状回内细胞的密度已与对照组相当;而16 ml/kg乙醇处理在灌胃后2 h即可观察到齿状回细胞结构的改变,表现为细胞密度的降低,细胞间隙的增大等,4 h时乙醇对齿状回内神经元细胞的损伤进一步加重,与对照组相比,可见细胞数目明显减少,细胞排布的紧密度降低,灌胃8 h后,在齿状回内可观察到明显的空隙结构,神经元细胞排布分散零乱,其层状结构已完全消失,由此可知高浓度的乙醇可导致齿状回神经元细胞致密结构出现严重损伤,至灌胃12 h时,齿状回颗粒细胞排布结构尚未恢复至正常。2.免疫荧光结果显示,与对照组相比,乙醇处理组中齿状回神经元Neu N荧光表达强度减弱。乙醇灌胃1 h后,4 ml/kg、8 ml/kg及16 ml/kg乙醇处理组大鼠齿状回及海马CA3及CA4中Neu N的表达量即表现为不同程度的减少;作用2 h时,大鼠齿状回及海马CA3及CA4神经元中Neu N的荧光强度进一步减弱,提示酒精可导致神经元细胞密度的降低,在形态结构上表现为齿状回内颗粒细胞间隙增大,细胞排列疏松、紊乱,海马CA3及CA4锥体细胞数目减少,分布散乱;至4 h时,8 ml/kg及16 ml/kg乙醇处理组中Neu N表达量持续减少,仅可在齿状回及海马CA3及CA4局部区域内观察到Neu N表达分布,可见大量的空隙样结构分布,上述结果提示齿状回颗粒细胞的层状排布结构受损严重,海马内锥体细胞损伤程度进一步加剧。至8 h时,4 ml/kg乙醇处理组Neu N荧光强度已与对照组相当,而中高剂量组在乙醇灌胃后12 h时其齿状回Neu N表达尚未恢复至正常水平,且细胞排布仍呈现为松散态。3.激光共聚焦Neu N+dapi表达结果可知,neun标记神经元核,DAPI可标记所有细胞的胞核,乙醇灌胃1 h后,4 ml/kg、8 ml/kg及16 ml/kg乙醇处理组大鼠齿状回及海马CA3及CA4中Neu N的表达开始减弱;作用2 h时,大鼠齿状回及海马CA3及CA4神经元中Neu N的表达进一步减弱,形态结构上出现齿状回内颗粒细胞间隙增大,细胞排列疏松、紊乱,海马CA3及CA4锥体细胞数目减少,分布散乱;至4 h时,8 ml/kg及16 ml/kg乙醇处理组中Neu N荧光表达量较弱,仅可在齿状回及海马CA3及CA4局部区域内可观察到Neu N表达分布,齿状回颗粒细胞的层状排布结构明显受损,可见空隙样结构分布,海马内锥体细胞损伤程度进一步加剧,可见少数细胞表现为空泡样结构。至8 h时,4ml/kg组Neu N荧光强度已与对照组无明显差别,而中高剂量组在灌胃后12 h时其齿状回Neu N表达尚未恢复,且细胞排布仍呈现为松散态。结论:乙醇灌胃后可导致海马及齿状回中Neu N的表达及分布发生改变,与作用时间相关。乙醇灌胃后可导致大鼠齿状回及海马神经元细胞层状排布结构发生改变,表现为细胞排列疏松,细胞间隙增大,海马及齿状回中锥体细胞及颗粒细胞排布结构的影响程度与酒精摄入剂量和作用时间密切相关。
【关键词】：乙醇 海马 神经元核蛋白 激光扫描共聚焦显微镜
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：D919
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 引言12-15
• 材料与方法15-22
• 1. 实验材料15-18
• 2. 实验方法18-22
• 实验结果22-25
• 讨论25-30
• 结论30-31
• 附图31-43
• 综述43-55
• 参考文献55-64
• 个人简历64-65
• 致谢65

【参考文献】

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本文编号：396732