黑龙江野生黑木耳种质资源的SSR分析
发布时间：2020-12-19 13:33
黑木耳味道鲜美,营养丰富,是我国主要的食用菌之一。黑龙江作为我国黑木耳的主产区之一,具有得天独厚的地理环境,孕育有丰富的野生黑木耳种质资源。本实验对黑龙江野生黑木耳种质资源进行一个初步的探究,为新菌种的筛选驯化培育工作提供一定的理论依据；对于全面了解黑龙江地区的黑木耳种质资源以及搜集保存野生黑木耳菌株具有重要意义；此外,从分子水平上对于新菌种的知识产权保护,加强菌种监管等方面有一定的理论意义。本实验主要有以下结果：（1）从黑龙江地区采集并分离纯化培养后共获得31株野生黑木耳菌株。（2）对分离获得的菌株进行菌丝体培养后进行菌丝基因组DNA提取,利用基础PCR（Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应）反应体系筛选出22对SSR（Simple Sequence Reapt微卫星序列）引物,然后对SSR-PCR反应体系进行了相关的优化实验。共获得条带位点103个,其中102个多态性位点,多态性位点比例高达99%,每对引物检测出多态性位点1-10个,引物的PIC （Polymorphism Information Content引物多样性指数）值为0.47-0.91之间,...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑木耳生活史Fig.1-1LifecycleofAuriculariaauricula1.1.3黑木耳应用价值
不足之处是栽培周期较长，需2?3年。主要分为段木栽培前准备，人工接种与发菌期管理，出耳采收及越冬管理等过程，详细工艺流程如图1-2。栽培期确定砍树一剔枝截段令架晒 #人工接种￠1菌种选择 Mr加工!fc藏 越冬管理 h堆发菌I ^^采收 管理 起架 ? 清场搭棚 ? 排场图1-2黑木耳段木栽培流程Fig. 1-2 Auricularia auricula wood cultivation process(2)代料栽培随着社会的发展，科技的进步，20世纪70年代我国开始进行代料栽培黑木耳的研宄丨黑木耳代料栽培具有原料来源广泛、周期短、产量高、效益好等特点，且可节省木材，不受地域限制，现已在黑龙江、吉林等省份广泛推广。代料栽培黑木耳可分塑料袋栽和瓶栽两种。两者在配料、接种、出耳管理等方面基本相似。1)栽培季节：代料栽培黑木耳一年可安排两季，即春季和秋季。2)栽培场所：栽培场所选在室内或室外均可，室内栽培对温度，湿度，通气等条件容易控制，但要注意通风满足黑木耳对氧气的需求并增加光照。另外，耳棚附近应供水方便，环境卫生。3)培养料配制：代料栽培黑木耳的原料很多，主要的有棉籽壳，杂木屑，稻草，玉米芯等
3.1菌种分离本实验对采集到的野生菌种材料全部进行了分离，获得31株原始菌株。采用内部组织挑取分离的方法而未使用耳片组织切块的方法，从耳片内部挑取菌丝组织，避免了因为耳片外部带菌造成菌株分离失败，分离的菌丝组织经过培养都获得了相应的纯菌，纯化培养成一级菌种。一级菌种经过三角瓶液体接种培养均获得了大量的菌丝体，通过纱布过滤、滤纸吸水、烘箱供干后获得含水量较少的菌丝，适于进行基因组DNA提取，于一2(rC保存备用。3.2基因组DNA提取采用改良的SDS方法从供试菌株中提取DNA，取样加适量Loading Buffer釆用丨％琼脂糖凝胶电泳，160V (5V/cm)电压电泳30min左右，于凝胶成像仪下观察并保存图象，部分菌株样品提取效果见图3-1，图中1?28为表1-1中菌株编号；M为DL2000 Marker。琼脂糖凝胶电泳结果显示条带清晰，整齐，无拖尾、弥散等现象，说明提取的DNA比较纯，基本无降解，效果较好，符合实验要求，可以进行后续PCR实验。
本文编号：2925992
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黑木耳生活史Fig.1-1LifecycleofAuriculariaauricula1.1.3黑木耳应用价值
不足之处是栽培周期较长，需2?3年。主要分为段木栽培前准备，人工接种与发菌期管理，出耳采收及越冬管理等过程，详细工艺流程如图1-2。栽培期确定砍树一剔枝截段令架晒 #人工接种￠1菌种选择 Mr加工!fc藏 越冬管理 h堆发菌I ^^采收 管理 起架 ? 清场搭棚 ? 排场图1-2黑木耳段木栽培流程Fig. 1-2 Auricularia auricula wood cultivation process(2)代料栽培随着社会的发展，科技的进步，20世纪70年代我国开始进行代料栽培黑木耳的研宄丨黑木耳代料栽培具有原料来源广泛、周期短、产量高、效益好等特点，且可节省木材，不受地域限制，现已在黑龙江、吉林等省份广泛推广。代料栽培黑木耳可分塑料袋栽和瓶栽两种。两者在配料、接种、出耳管理等方面基本相似。1)栽培季节：代料栽培黑木耳一年可安排两季，即春季和秋季。2)栽培场所：栽培场所选在室内或室外均可，室内栽培对温度，湿度，通气等条件容易控制，但要注意通风满足黑木耳对氧气的需求并增加光照。另外，耳棚附近应供水方便，环境卫生。3)培养料配制：代料栽培黑木耳的原料很多，主要的有棉籽壳，杂木屑，稻草，玉米芯等
3.1菌种分离本实验对采集到的野生菌种材料全部进行了分离，获得31株原始菌株。采用内部组织挑取分离的方法而未使用耳片组织切块的方法，从耳片内部挑取菌丝组织，避免了因为耳片外部带菌造成菌株分离失败，分离的菌丝组织经过培养都获得了相应的纯菌，纯化培养成一级菌种。一级菌种经过三角瓶液体接种培养均获得了大量的菌丝体，通过纱布过滤、滤纸吸水、烘箱供干后获得含水量较少的菌丝，适于进行基因组DNA提取，于一2(rC保存备用。3.2基因组DNA提取采用改良的SDS方法从供试菌株中提取DNA，取样加适量Loading Buffer釆用丨％琼脂糖凝胶电泳，160V (5V/cm)电压电泳30min左右，于凝胶成像仪下观察并保存图象，部分菌株样品提取效果见图3-1，图中1?28为表1-1中菌株编号；M为DL2000 Marker。琼脂糖凝胶电泳结果显示条带清晰，整齐，无拖尾、弥散等现象，说明提取的DNA比较纯，基本无降解，效果较好，符合实验要求，可以进行后续PCR实验。
本文编号：2925992
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