抗MUC1单克隆抗体制备及其MR纳米探针的构建与初步研究

发布时间：2017-08-19 18:29

  本文关键词：抗MUC1单克隆抗体制备及其MR纳米探针的构建与初步研究

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【摘要】：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,早期诊断有重要意义。目前,乳腺癌的分子诊断,尤其是基于单克隆抗体的诊断以其靶向性好,特异性高而备受关注。MUC1是一种在乳腺癌等恶性肿瘤细胞中高度表达的多形上皮粘蛋白,是一个重要的肿瘤相关抗原,而目前国内并没有自主知识产权的抗MUC1单克隆抗体。因此,制备一种高特异性的,高亲和力的抗MUC1单克隆抗体,并且经与金磁纳米颗粒耦联,应用于乳腺癌活体分子成像临床基础研究,会为今后乳腺癌分子诊断的临床应用研究奠定重要基础。目的本研究拟探讨抗MUC1单抗及其纳米探针的制备、鉴定及初步应用。实验过程分为两个部分:1.制备并鉴定抗MUC1单克隆抗体,检测其在乳腺癌免疫组化中的初步应用;2.制备并鉴定靶向抗MUC1的MR纳米探针,应用3.0T磁共振设备检测其在乳腺癌磁共振分子成像中的初步应用的可行性。方法1.用合成的MUC1重复序列短肽与KLH蛋白偶联后作为抗原免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术筛选出稳定分泌单克隆抗体的细胞株。制备单克隆抗体,以ELISA、Western blot、流式细胞术、免疫荧光法对抗体进行鉴定及亚类分析,用免疫组织化学染色方法将抗体应用于人乳腺癌组织、良性纤维腺瘤、乳腺囊性增生症及正常乳腺组织的临床检测。2.用研制的抗MUC1单克隆抗体,与金磁纳米颗粒耦联,构建MUC1特异性MR分子探针MUC1@Gold Mag,用流式细胞术,透射电镜,激光共聚焦显微镜等方法检测其与乳腺癌细胞结合的特异性;应用3.0T磁共振扫描仪,将乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G-2这两种细胞分别与MUC1@Gold Mag和无关抗体@Gold Mag交叉配对,对各组细胞行T2W1并分别测量其信号强度。建立MCF-7和Hep G-2荷瘤裸鼠模型,对两组荷瘤裸鼠经尾静脉注射MUC1@Gold Mag和无关抗体@Gold Mag,分别在注射前、注射后6 h、12 h和24 h行MR扫描,观察其对肿瘤信号T2W1的影响,分别测量其信号强度,探讨其应用于MR体内成像的可行性,分析比较信号强度的差异性。结果1.获得4株稳定分泌抗MUC1的杂交瘤细胞株,第1株反应性最强,效价1:10以上。抗体亚型3株为Ig G1,1株为Ig M,轻链均为?型。经Western blot、流式细胞术、免疫荧光、免疫组化检测证实抗体与乳腺癌细胞MCF-7特异性结合,单克隆抗体检测MUC1在乳腺癌组织与良性纤维瘤、囊性增生以及正常乳腺组织之间的表达存在显著性差异(P0.01)。2.成功构建MUC1特异性MR分子探针MUC1@Gold Mag,流式细胞术,透射电镜和激光共聚焦显微镜观察发现MCF-7细胞与MUC1@Gold Mag特异性结合。MUC1@Gold Mag可显著性降低MCF-7的T2W1信号。MCF-7荷瘤裸鼠注射MUC1@Gold Mag后,6 h、12 h、24 h肿瘤组织T2W1信号强度较平扫显著降低(P0.05)。而Hep G-2荷瘤裸鼠在平扫和注射对比剂后6 h、12 h、24 h的肿瘤信号强度差异无统计学意义。结论1.成功制备了抗MUC1单克隆抗体,经检测该抗体特异性强,效价高。这为乳腺癌早期诊断和靶向治疗的进一步研究奠定了基础。2.MUC1靶向性MR分子探针MUC1@Gold Mag具有良好的理化性质和免疫活性,可特异性降低MCF-7细胞的T2W1信号,对活体乳腺癌组织具有靶向性的增强效果。
【关键词】：乳腺癌 MUC1 单克隆抗体 纳米探针 MR成像
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 文献回顾12-20
• 实验一 抗MUC1单克隆抗体的制备鉴定与初步应用研究20-33
• 1 前言20
• 2 材料20-21
• 3 方法21-27
• 4 结果27-31
• 5 讨论31-33
• 实验二 MR纳米探针的构建、鉴定及其体内成像的初步研究33-42
• 1 前言33
• 2 材料33-34
• 3 方法34-37
• 4 结果37-41
• 5 讨论41-42
• 小结42-43
• 参考文献43-48
• 附录48-50
• 个人简历和研究成果50-51
• 致谢51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 阎洪彦,王立顺;MUC1粘蛋白—肿瘤生物治疗的新靶点[J];国外医学(免疫学分册);2000年02期

2 孔君;刘箐;韩跃武;王天昌;刘金芝;;单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景[J];免疫学杂志;2011年02期

3 马忠良,李振甫,张虹,王占民;抗乳腺癌单克隆抗体的制备及其应用[J];四川肿瘤防治;2001年02期

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本文编号：702279