应用于甜瓜DUS测试分子图谱的构建及遗传多样性分析

发布时间：2017-08-19 06:14

  本文关键词：应用于甜瓜DUS测试分子图谱的构建及遗传多样性分析

  更多相关文章： 甜瓜 核心引物 指纹图谱 遗传多样性分析 纯度鉴定

【摘要】：甜瓜DNA指纹图谱库的建立对甜瓜品种纯度及真实性鉴定、新品种权保护等有非常重要应用价值,甜瓜遗传多样性的分析对杂种优势群划分、种质创新及新品种选育也有非常重要的指导意义。SSR标记被认为是指纹图谱构建最理想的标记。本研究利用SSR标记对PCR扩增反应体系进行了优化,初次探讨了多重SSR-PCR扩增体系在甜瓜上的可行性,旨在提高鉴定效率及节省时间。在此基础上,利用13份遗传差异大的甜瓜种质进行核心引物的筛选,并通过核心引物对甜瓜种质进行指纹图谱构建、遗传多样性分析以及对甜瓜杂交组合进行纯度鉴定,主要研究结果如下:1.对PCR扩增体系中的模板DNA、dNTPs、引物、Taq酶及Mg2+的浓度进行梯度设计,得到了最优PCR扩增体系,同时建立了适用于甜瓜的双重SSR-PCR扩增体系,使得SSR检测效率提高了2倍,节省了成本。2.从174对SSR引物中筛选了22对核心引物,在13个甜瓜种质中共扩增了77个多态性位点,每对引物可以检测到2~4条数目不等的多态性条带,平均为3.5条,多态性信息含量(PIC)为0.737~0.839,平均0.806,22对引物中有18对分布在甜瓜的10对染色体上。3.利用22对核心引物构建了52份甜瓜种质的指纹代码,并将其全部转化为二维编码,其中有7组具有相同指纹代码的材料,总共涉及23份材料,其余29份甜瓜种质的指纹代码是唯一的。4.基于20个形态性状的聚类分析结果显示,遗传相似系数为0.07~0.72,平均为0.39,遗传相似系数大于0.07时,所有甜瓜种质可划分为9大组群,且组群Ⅰ至组群Ⅳ的多样性偏低,组群Ⅴ至组群Ⅸ的甜瓜种质遗传多样性依次增高。5.基于22对核心引物聚类分析结果显示,遗传相似相系数在0.55~1.00,平均为0.78。当遗传相似系数大于0.55时可将95份甜瓜种质分为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜两大类,同时这两大类又可按不同变种分为不同的亚类。6.用74对SSR引物对16个甜瓜组合进行筛选,获得了10对表现出多态性和共显性的引物,通过这些引物的不同组合可以将16个杂交组合鉴定出来,为保护知识产权及实际应用提供了有力支撑。
【关键词】：甜瓜 核心引物 指纹图谱 遗传多样性分析 纯度鉴定
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S652;Q943.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 第一章 绪论10-19
• 1.1 甜瓜种质资源的多样性10-12
• 1.2 国内外植物品种DUS测试的发展现状12-14
• 1.2.1 植物新品种DUS测试的概述13
• 1.2.2 DUS测试方法13-14
• 1.2.3 DUS测试在育种过程中存在的问题14
• 1.3 分子标记技术在DUS测试中的应用14-15
• 1.4 指纹图谱技术在DUS测试中的应用15-16
• 1.5 DNA指纹图谱技术应用需解决的问题16
• 1.6 本研究的目的和意义及研究内容16-19
• 1.6.1 本研究的目的和意义16-17
• 1.6.2 研究内容17-18
• 1.6.3 技术路线18-19
• 第二章 PCR扩增体系的优化及多重SSR-PCR体系的建立19-29
• 2.1 PCR扩增体系的优化19-23
• 2.1.1 试验材料19-20
• 2.1.2 试验方法20-22
• 2.1.3 结果与分析22-23
• 2.2 多重SSR-PCR扩增体系的建立23-27
• 2.2.1 试验材料23-24
• 2.2.2 试验方法24-25
• 2.2.3 结果与分析25-27
• 2.3 讨论27-29
• 第三章 SSR核心引物的筛选与确立29-36
• 3.1 试验材料29-30
• 3.2 试验方法30-31
• 3.2.1 SSR引物的确定30
• 3.2.2 数据记录与统计分析30-31
• 3.3 结果与分析31-34
• 3.3.1 候选引物的分布31-32
• 3.3.2 核心引物的确定及多态性信息32-34
• 3.4 讨论34-36
• 第四章 部分甜瓜品种（系）指纹图谱的构建36-44
• 4.1 试验材料36
• 4.2 试验方法36-39
• 4.2.1 指纹图谱代码36-39
• 4.2.2 指纹图谱QR编码39
• 4.3 结果与分析39-42
• 4.3.1 甜瓜种质的指纹代码分析39-42
• 4.3.2 指纹图谱QR编码42
• 4.4 讨论42-44
• 第五章 甜瓜种质遗传多样性分析44-60
• 5.1 供试材料44-45
• 5.2 试验方法45-47
• 5.2.1 形态性状记录45-47
• 5.2.2 形态学标记和SSR标记统计分析47
• 5.3 结果与分析47-57
• 5.3.1 基于形态学标记的聚类分析47-50
• 5.3.2 基于SSR标记的聚类分析50-56
• 5.3.3 形态学标记与SSR标记聚类结果的比较分析56-57
• 5.4 讨论57-60
• 5.4.1 基于形态学性状甜瓜遗传多样性的分析57-58
• 5.4.2 基于SSR标记甜瓜遗传多样性的分析58-59
• 5.4.3 基于SSR标记甜瓜遗传多样性的分析59-60
• 第六章 甜瓜杂交种SSR指纹图谱构建与纯度鉴定60-66
• 6.1 试验材料60-61
• 6.2 试验方法61-62
• 6.2.1 多态性引物的筛选62
• 6.2.2 多态性引物在杂种纯度检测中的应用62
• 6.3 结果与分析62-65
• 6.3.1 用于16个甜瓜组合纯度鉴定的多态性引物62-64
• 6.3.2 甜瓜杂交种的纯度鉴定64-65
• 6.4 讨论65-66
• 全文结论66-68
• 参考文献68-77
• 发表论文和参加科研情况说明77-78
• 附录78-94
• 致谢94-95

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本文编号：699109