玻连蛋白单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用

发布时间：2017-08-30 00:33

  本文关键词：玻连蛋白单克隆抗体的制备及在临床检测中的初步应用

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【摘要】：背景和目的：肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一。其早期诊断困难,病程发展迅速,目前尚没有有效的预防和治疗措施。因此,寻找新的肝癌标志物分子,开发临床检测用试剂,将科研成果转化为临床产品,具有重要的实际意义和应用价值。玻连蛋白(Vitronectin, VN)是在近些年的研究中发现的一种肝癌的潜在疾病标志物。研究表明其在肝癌进程的不同阶段,表达水平有所不同。因此,获得特异性针对VN的抗体,对于深入研究VN与肝癌的关系,了解其表达水平与疾病进程的关联性是十分必要的。目前,国内尚没有针对VN蛋白的高质量的抗体和临床试剂盒。本研究拟开发具有自主知识产权的抗VN蛋白的单克隆抗体以及可配对抗体对,并研发以夹心ELISA技术为基础的临床检测试剂盒原料。方法：His-VN重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,作为免疫原制备单抗。利用五周标准小鼠单抗制备佐剂免疫小鼠,采用ELISA法初步筛选抗体,Western blot对初步筛选得到的抗体进行特异性鉴定。用筛选得到的抗体对肝癌病人血清及正常人血清进行ELISA检测,采取ELISA双抗夹心法和ForteBio Octet Red多通道生物分子相互作用系统筛选配对抗体,并利用筛选出的抗体对正常人血清、乙肝病人血清及肝硬化病人血清临床样本进行检测。结果：1.经过ELISA筛选得到4株针对VN的杂交瘤细胞株,分别为3D2,4D11,6G5和8D9。2.6G5和8D9两株抗体可特异性识别肝癌病人血清中的VN,并能够检测到肝癌病人血清中VN与正常人血清中VN的差异表达(P0.05)。3.6G5和8D9两株杂交瘤细胞株经ELISA双抗夹心法和Fortebio法检测可成功配对。4.成功配对的两株杂交瘤细胞株6G5和8D9应用ELISA双抗夹心法检测正常人血清、乙肝病人血清及肝硬化病人血清,检测到VN差异表达(P0.001)。结论：成功的制备出抗VN的单克隆抗体,筛选到的两株抗体可配对。筛选出的抗体可检测到正常人血清、乙肝病人血清、肝硬化病人血清及肝癌病人血清中VN差异表达,为进一步开发临床检测血清VN的肝癌预警试剂盒提供试剂和原料。
【关键词】：玻连蛋白 原核表达 单克隆抗体 ELISA双抗夹心法 抗体配对
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R735.7
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-13
• 2 材料与方法13-27
• 2.1 实验材料13-17
• 2.2 实验方法17-27
• 3 结果27-36
• 3.1 His-VN重组蛋白表达纯化结果27-28
• 3.2 小鼠抗血清效价检测结果28-29
• 3.3 杂交瘤细胞的生长情况29-30
• 3.4 融合率及克隆化结果30-31
• 3.5 Western blot结果分析31-32
• 3.6 抗体配对实验结果32-34
• 3.7 ELISA法检测不同肝病病人血清中的VN34-35
• 3.8 自制VN mAb与商品化VN检测试剂盒比较35-36
• 4 讨论36-40
• 5 结论40
• 6 参考文献40-45
• 附录45-46
• 致谢46-47
• 综述47-61
• 参考文献54-61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 戴淑真;刘海霞;王斌;徐冰;车艳辞;韩娟;;检测子宫内膜异位症患者血清中差异表达蛋白的研究[J];中国误诊学杂志;2006年21期

2 刘洋洋;李晓玲;左威;迟健;柳刚;孙龙钦;姜俊义;刘莹;;S100A9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2014年09期

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本文编号：756300