运动性动情周期抑制大鼠卵巢线粒体DNA拷贝数的相关研究

发布时间：2019-05-22 20:47

【摘要】：研究目的:观察大鼠在运动性动情周期抑制状态下卵巢线粒体DNA拷贝数的变化以及卵巢NADH表达水平的变化。从分子水平初步探讨运动性动情周期抑制的发病机制和导致的病理结果。以期为运动性月经失调的预防与治疗提供新的线索。研究方法:将健康且动情周期正常的SD大鼠(3月龄、雌鼠)30只随机分为2组:空白对照组(C组,n=10)、运动组(E组,n=20)。对照组不做任何干预,自然喂养至实验结束。运动组大鼠每天进行大负荷游泳训练,每周训练6天,休息1天。所有大鼠每天进行阴道涂片以观察其动情周期的变化。当运动组大鼠连续3个动情周期出现阴道上皮角化细胞大量减少甚至消失时确定实验造模成功。实验期间,运动训练组大鼠死亡5只,皆因游泳训练过程中呛水致死。造模成功后观察大鼠的一般情况及体重变化,无菌提取其卵巢,用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)法扩增线粒体DNA测其拷贝数,用已知浓度的质粒DNA做为标准品做标准曲线来定量线粒体DNA的拷贝数,分析对照组和运动组的拷贝数变化情况,同时分析其与突变情况的相关性。用蛋白质印迹(Western blot)法检测线粒体呼吸链复合物Ⅲ(NADH限速酶)的蛋白表达水平。研究结果:1.随着实验过程深入,运动组大鼠陆续出现动情周期紊乱,活动减少、反应迟钝、精神萎靡、易受惊吓,摄食饮水减少,毛发脱落稀疏无光泽,体重增长缓慢。对照组大鼠动情周期正常,发育良好、活泼好动,饮水摄食正常,毛发整洁有光泽,体重稳定增长。2、本实验结果显示,运动组个体较对照组个体卵巢mtDNA相对拷贝数均明显降低(p0.01)。对照组平均mtDNA相对拷贝数为82.74±3.85,运动组平均mtDNA相对拷贝数仅为38.54±1.42,两组平均值表现出极显著差异(p0.01)。3、结果统计将样本NADH(51KD)与对应内参蛋白GAPDH(36KD)两灰度值相比所得比值进行统计学分析。对照组NADH平均灰度比值为0.89±0.17,而在运动组中该值为0.36±0.09,差异极显著(p0.01)。研究结论:1、长期大负荷运动不利于大鼠的一般情况和脏器的发育,使机体长期处于无氧刺激过程,导致卵巢线粒体结构和功能发生病理性改变,可能导致大鼠动情周期抑制。2、长期大负荷运动影响mtDNA的自我复制功能,运动组大鼠卵巢mtDNA拷贝数显著降低,提示长期高强度训练抑制线粒体DNA的复制功能。3、长期大负荷运动抑制mtDNA的转录功能,降低线粒体的酶活性,使呼吸链酶活性下降。机体长期启用低、无氧供能途径,相对削弱了线粒体的氧化磷酸化功能。本实验从线粒体方面对长期高强度运动导致动情周期抑制提供了相应的实验数据支持,为运动性闭经的预防和治疗提供了新的线索,有待进一步探索。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of ovarian DNA copy number and ovarian NADH expression level under exercise estrous cycle inhibition in rats. The pathogenesis and pathological results of motor estrous cycle inhibition were discussed at molecular level. In order to provide new clues for the prevention and treatment of exercise-induced menstrual disorders. Methods: thirty healthy SD rats with normal estrous cycle (3 months old, female rats) were randomly divided into two groups: blank control group (group C, n 鈮，

本文编号：2483249