人体少量血清中三类环境内分泌干扰物的气质联用测定法的优化

发布时间：2020-07-07 22:07

【摘要】：多溴联苯醚(Polybrominated Diphenyl Ethers,PBDEs)、邻苯二甲酸酯(Phthalate Esters,PAEs)和双酚A(Bisphenol A,BPA)作为三类典型的环境内分泌干扰物(Environmental Endocrine Disruptors,EEDs),受到广泛关注,也与育龄期妇女常见的内分泌干扰疾病—多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)密切相关。具有临床背景的血清样本体积小且珍贵、基质复杂、污染物含量较低等特点增加了污染物定量分析的难度。本文以课题组前期研究为基础,优化得到一种同时检测人体少量血清中PBDEs、PAEs和BPA三类环境内分泌干扰物的气相色谱-质谱联用法(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)。本研究通过优化实验步骤与细节、实验试剂和材料等来达到降低PAEs的背景干扰。确定了萃取溶剂为10 mL、5 mL、5 mL乙醚进行3次涡旋萃取;BDE-77、BDE-181、MBDE-208和~(13)C_(12)-BPA分别作为三四五溴联苯醚、六七溴联苯醚、十溴联苯醚及BPA的回收率指示物;采取进一步过酸性硅胶提高PBDEs组分的回收率等。通过加入浓盐酸,破坏血清样品的蛋白质结构,乙醚萃取,硅胶柱净化分离后得到PBDEs、PAEs和BPA三个组分,分别加入内标定容,用GC-MS的选择离子模式(Single Ion Monitor,SIM)测定。PBDEs、PAEs和BPA的工作曲线线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99。在血清加标实验中,PBDEs、PAEs和BPA的回收率指示物的回收率分别为50.5%-124.6%、48.4%-90.6%、68.6%-84.8%,其相对标准偏差(Relative Standard Deviation,RSD)分别为3.1%-14.6%、0.9%-12%、8.1-19.6%。PBDEs、PAEs和BPA的检出限(Limits of Detection,LOD)分别为0.02-0.05 ng/mL,0.94-1.91 ng/mL,0.15 ng/mL。使用已优化的方法检测21份人体血清,结果表明:扣除背景值后,PBDEs、PAEs和BPA三类环境内分泌干扰物含量分别为:1.62-97.34 ng/g、6.31-17.99 ng/mL、1.07-9.16ng/mL。该方法灵敏度高、准确性和重现性良好,可用于人体少量血清样品中痕量PBDEs、PAEs和BPA这三类物质的检测。
【学位授予单位】：广州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R12;O657.63
【图文】：

图 2-1 PBDEs 组分标准样品（a）和血清样品（b）SIM 模式下的总离子流图Fig 2-1 Total ion chromatogram of polybrominated diphenyl ethers of standard sample (a) and serumsample(b) in SIM mode2.3.2. PAEs 组分色谱条件：DB－5MS 毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μmm，Agilent 公司）；以纯度为 99.999%的高纯氦气为载气，恒流流量 1.0 mL/min；升温程序是初始温度为 100℃保持 1min，然后以 20℃/min 升温至 170℃，再以 5℃/min 升温至 270℃，保持 10min。进样口温度 280℃；不分流进样，进样体积为 1μL。PAEs 质谱条件：电离模式为电子轰击源（Electron Impact, EI），能量为 70eV；离子源温度 260℃；接口温度 280℃；溶剂延迟时间 5min。其出峰时间，特征离子见表 2-3图 2-2 为 PAEs 标准样品（a）和血清样品（b）SIM 模式下的总离子流图。

图 2-2 PAEs 组分标准样品（a）和血清样品（b）SIM 模式下的总离子流图Fig 2-2 Total ion chromatogram of phthalate esters of standard sample (a) and serum sample（b）in SIMmode2.3.3. BPA 组分色谱条件：DB－5MS 毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm，Agilent 公司）；以纯度为 99.999%的高纯氦气为载气，恒流流量 1.0 mL/min；升温程序：初始温度为 100℃，保持 1min，然后以 30℃/min 升温至 235℃，再以 4℃/min 升温至 250℃，接着以 30℃/m升温至 280℃，保持 10min。进样口温度 270℃；不分流进样，进样体积为 1 μL。BPA质谱条件：电离模式为EI源，能量为70 eV；离子源温度250℃，接口温度280℃溶解延迟时间 7.5min。其出峰时间，特征离子见表 2-3。图 2-3 为 BPA 标准样品（a）和血清样品（b）SIM 模式下的总离子流图。

图 2-3 BPA 组分标准样品（a）和血清样品（b）SIM 模式下的总离子流图Fig 2-3 Total ion chromatogram of bisphenolAof standard sample (a) and serum sample（b）in SIM mo表 2-3 PBDEs, PAEs, BPA 的保留时间、特征离子Table 2-3 Retention times and characteristic ions (m/z) for PBDEs, PAEs, BPA.目标物 保留时间 min) 定量离子(m/z) 定性离子(m/z)BDE-28 6.39 79、81 81BDE-47 9.07 79、81 81BDE-66 9.76 79、81 81BDE-77(RS) 10.65 79、81 81BDE-100 11.74 79、81 81BDE-99 12.59 79、81 81BDE-85 13.78 79、81 81

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本文编号：2745673