椭圆食粉螨卵黄原蛋白基因对重金属铅胁迫的响应机制

发布时间：2020-07-08 15:50

【摘要】：重金属污染已成为世界性环境污染问题,因其不可降解及能够通过食物链富集的特点,对生态系统中的生物的生长繁殖造成巨大影响。卵黄原蛋白是昆虫卵黄发生的前体,是昆虫生殖的关键物质基础。椭圆食粉螨Aleurolyphus ovatus(Troupeau)是一种可快速繁殖且易于饲养的储藏物害螨,对影响其生殖的环境因素的研究有利于为害螨防治提供理论基础。因此本文以椭圆食粉螨为研究对象,克隆并分析与其繁殖相关的卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)基因序列并探究Vg基因对铅胁迫的响应机制。具体方法为在人工饲料中添加不同的铅,设置包括对照在内的5个浓度梯度(0 mg?kg~(-1)、12.5 mg?kg~(-1)、25 mg?kg~(-1)、50 mg?kg~(-1)及100 mg?kg~(-1)),分别测定不同浓度下长期铅胁迫后其卵黄原蛋白基因的表达;分别使用Western Blot及ELISA试剂盒法测定不同浓度胁迫下椭圆食粉螨卵黄原蛋白的含量。主要结果如下:1、本研究得到AOVg基因cDNA的全长为6270 bp,开放阅读框(ORF)为6030 bp,共编码2009个氨基酸残基,5'端非翻译区(Untranslated Region,UTR)长度为128 bp,3'UTR长度为112bp,Vg蛋白有Vitellogenin-N,DUF1943和VWD三个保守区域,19个氨基酸的信号肽;C-末端有GL/ICG,DGXR保守序列和半胱氨酸残基(C)。2、成功表达出一段含有258个氨基酸的AOVg蛋白保守片段,原核表达产物49.18kDa,命名为pET-32a-AOVg,重组蛋白以包涵体形式分泌;成功制备AOVg多克隆抗体Anti-AOVg,经Western Blot检测后对AOVg具有较好的特异性。3、对重金属铅胁迫影响椭圆食粉螨卵黄原蛋白的转录与翻译进行了测定。结果表明,低浓度铅胁迫能促进AOVg的表达,差异不显著,但高浓度铅胁迫会显著促进AOVg基因表达。从整体来看随着铅胁迫浓度升高,铅胁迫的促进效果呈现出先升高后降低随后又升高的趋势。对不同浓度铅胁迫下AOVg蛋白含量的研究表明,随着铅胁迫浓度的升高,AOVg含量有着先升高再降低的趋势,但随着铅胁迫浓度继续升高(100 mg?kg~(-1)),AOVg含量有升高的趋势。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S379.5;X503.22
【图文】：

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第 2 章椭圆食粉螨卵黄原蛋白的克隆与序列分析析提取质量粉螨总 RNA 的提取质量对于扩增特异性的目的很关键。在本研究中，取 5μL 椭圆食粉螨总 R结果如图 2.1，从图中可以看到有明显的两条亮18S 较亮。说明椭圆食粉螨总 RNA 的提取完整光度计测得：RNA 浓度为 1130ng/μl，A260/A的 RNA 纯度较好，可以用来进行下一步的实验

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2.2 椭圆食粉螨 AOVg 扩增ctrophoretogram of amplifying椭圆食粉螨 AOVg 3’和 5’扩phoretogram of amplifying V及氨基酸序列特征

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19.3 椭圆食粉螨 AOVg 3’和 5’扩增情况ctrophoretogram of amplifying Vg 3’and酸及氨基酸序列特征因 cDNA 的全长为 6270 bp，NCORF）为 6030 bp，起始密码子（ 6155 bp，共编码 2009 个氨基TR）长度为 128 bp，3'UTR 长度信号序列 AATAA 和 PolyA 尾，游 46bp 的位置。此外椭圆食粉螨序、卵裂位点和半胱氨酸残基等子式为 C10069H15922N2790O3038S49，

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