色谱质谱技术在化学药物杂质研究中的应用

发布时间：2017-03-19 16:01

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【摘要】：《化学药物杂质研究的技术指导原则》中规定：任何影响药物纯度的物质统称为杂质。杂质的研究是药品开发的一项重要内容，杂质是否能被全面准确地加以控制，直接关系到药品的质量可控性与安全性。所以在药物的研究、生产、供应和临床使用等方面，必须保证药物的纯度。规范地进行杂质的研究，并将其控制在一个安全、合理的限度范围之内，，才能保证药物的有效和安全。 近年来，随着各类药害事件发生频率的提高及国人对食品、药品安全性的关注程度的提高，CFDA对药物临床前研究中的杂质相关分析越来越重视，对杂质研究的要求已被提到一个空前的高度。杂质研究是否全面，准确已逐渐成为药物临床前申报是否成功的瓶颈之一。但与杂质研究的标准日益提高严重不适应的是目前研究的技术手段过于单一，过于陈旧。在传统的药物质量控制研究过程中，杂质分析主要以色谱方法为主，大多数搭配单一检测器，这就给药物的杂质研究带来以下几个问题： 第一、单一检测器难以对不同物化特性的杂质进行全面检测，容易造成杂质的遗漏。 第二、色谱方法只能对能够获取对照品的杂质进行鉴别，检测灵敏度及检测信息的局限性导致其在发现及鉴别痕量杂质及未知杂质方面存在困难。 第三、色谱方法在检测限及线性范围方面的局限性导致其在低丰度杂质的定量检测方面亦存在困难。 本研究针对目前化学药物杂质研究中存在的问题，将不同种类的色谱-质谱技术引入其中，遵循从简单到复杂，从个体到系统的原则，探索使用色谱-质谱技术对化学药物临床前研究中的杂质分析相关问题进行探讨，从实际案例中总结色谱-质谱技术在药物杂质的定性、定量分析中的可行性及方法、策略。 文章共分为以下几部分： 1.超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术在药物杂质定性鉴别中的应用 应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱对两种药物盐酸环喷托酯滴眼液和原料药三羟苄基苄丝肼中的杂质进行结构分析。实验发现，盐酸环喷托酯滴眼液在氧化条件下易产生一个杂质，该杂质保留时间在主成分之后。通过一级质谱、二级质谱以及主成分的裂解规律确定了该杂质的结构。对三羟苄基苄丝肼进行了进行了结构确认，通过液相质谱分离发现了4个杂质，利用UHPLC-Q-TOF/MS中提供的准确的分子量进行了分子式筛选，通过二级质谱的数据对4个杂质的结构进行了确认，并确定了其裂解规律。 实验表明，UHPLC-Q-TOF/MS在在线分析药物痕量杂质结构中具有方便、快捷的优势，可以大大提高了实验的效率。 2.盐酸普拉格雷片的杂质分析 本章首先结合四大光谱（NMR，UV，IR，MS）对三类仿制药盐酸普拉格雷片剂中3个杂质的对照品进行了结构分析，供后续研究使用。通过核磁分析对物质中的信号峰进行了归属，推断出了其具体结构，质谱分析对得到的结构进行了分子量及分子式的确认，红外光谱对3中物质中的官能团进行了分析，紫外光谱仪确定了3个标准品的最大吸收波长。然后利用UHPLC-Q-TOF/MS对盐酸普拉格雷片中的降解杂质进行分析。将盐酸普拉格雷原料药和制剂于一定的降解条件下（酸、碱、氧化、高温、光照）放置一定时间后进行分离分析。在空白对照样品中共发现了6个工业杂质，在进行降解的样品中共找到了13个降解杂质。最终结合质谱数据、文献调研以及药物的合成路线确定了各杂质的结构以及相应的裂解规律。文章阐明了盐酸普拉格雷片中潜在的降解杂质的来源及降解规律，可为药品生产过程提供了一定的参考和借鉴。 3.盐酸美金刚片的降解实验研究 本章首先利用气相色谱方法对仿制药品盐酸美金刚片中的有关物质进行定量方法开发，在方法专属性检查中发现降解实验中存在着严重的物料不守恒现象，即杂质的上升量远远小于主成分的下降量，经过条件优化不能得到改善，说明原方法对盐酸美金刚片有关物质的检查存在着一定的不足。利用UHPLC-Q-TOF/MS对降解样品进行检测并发现了新的杂质，初步解释了气相色谱中的不守恒现象。深入研究后，结果发现，在酸、碱、高温、氧化破坏中基本上可以达到物料守恒的要求，光照破坏中主成分的下降率和杂质的上升率均不明显，说明样品在光照下是稳定的。最后对在液相色谱-质谱中发现的降解杂质进行研究，确定了7个杂质的结构。本实验同时也说明了在实验过程中多种方法结合的必要性，实验结合多种分析仪器对盐酸美金刚片进行研究，为该药物质量控制方法的完善提供了依据。 4.盐酸美金刚片中杂质的限量检查 继前一章对盐酸美金刚片的定性分析后，本章将对其可能存在的重要的杂质进行限量分析，其中包括三个工艺杂质（1,3-二甲基金刚烷、3,5-二甲基-1-金刚烷醇、1-溴-3,5-二甲基金刚烷）和2个降解杂质（甲酰基美金刚胺、美金刚-乳糖结合物）。其中1,3-二甲基金刚烷、3,5-二甲基-1-金刚烷醇、1-溴-3,5-二甲基金刚烷、甲酰基美金刚胺为小分子化合物，利用气相色谱法进行研究；美金刚-乳糖结合物为大分子化合物，且没有紫外吸收的官能团，故利用HPLC-ELSD进行研究。结果表明，两种方法的灵敏度可达到要求，且5个物质的线性关系良好，仪器精密度良好，样品在一定时间内稳定，回收率均在80%-120%之间。 两种限量方法相辅相成，对盐酸美金刚中的杂质进行全面的限量控制，可作为保证该药品杂质控制的有效手段。 本研究从新药临床前申报的具体需求出发，综合运用色谱-质谱技术解决化学药物杂质研究中的各类定性、定量问题。将高分辨串联质谱技术应用于药物杂质的定性鉴别，建立了高灵敏度和高准确度的药物杂质分析方法。为将色谱-质谱技术从实验室过渡到药物研发领域做出了有益探索，为建立更高标准的药物质量控制体系尤其是杂质控制提供了参考和借鉴。
【关键词】：药物杂质 盐酸普拉格雷片 盐酸美金刚片 色谱-质谱技术
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R917;O657.63
【目录】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 缩略词13-14
• 第一章 前言14-18
• 一、 课题背景介绍14-17
• 二、 课题的研究内容和意义17-18
• （一） 课题的研究内容17
• （二） 课题的研究意义17-18
• 第二章 超高效液相色谱 四极杆飞行时间质谱联用技术在药物杂质定性鉴别中的应用18-33
• 第一节 概述18-19
• 第二节 实验部分19-33
• 一、 盐酸环喷托酯滴眼液中氧化杂质的结构确定19-24
• （一） 材料与试剂19
• （二） 色谱条件19
• （三） 质谱条件19-20
• （四） 供试品制备20
• （五） 结果20-24
• 二、 三羟苄基苄丝肼中杂质的结构鉴定24-32
• （一） 材料与试剂24
• （二） 色谱条件24
• （三） 质谱条件24-25
• （四） 供试品制备25
• （五） 结果25-32
• 三、 小结与讨论32-33
• 第三章 盐酸普拉格雷的杂质分析33-77
• 第一节 概述33-34
• 第二节 实验部分34-77
• 一、 盐酸普拉格雷杂质对照品结构确证34-53
• （一） 仪器与试药34
• （二） 核磁测试34-46
• （三） 高分辨质谱分析46-48
• （四） 紫外光谱测试48-50
• （五） 红外光谱测试50-53
• 二、 盐酸普拉格雷中降解杂质分析53-76
• （一） 材料与试剂53
• （二） 色谱条件53-54
• （三） 降解条件54
• （四） 供试品的制备54-76
• 三、 小结与讨论76-77
• 第四章 盐酸美金刚片的降解实验研究77-95
• 第一节 概述77-78
• 第二节 实验部分78-95
• 一、 盐酸美金刚片降解实验的气相色谱法研究78-84
• （一） 仪器78
• （二） 试剂和试药78
• （三） 色谱条件78
• （四） 供试品制备78-79
• （五） 结果79-84
• 二、 盐酸美金刚片降解实验的液相色谱 质谱研究84-94
• （一） 仪器84
• （二） 试剂和试药84
• （三） 色谱条件84
• （四） 质谱条件84-85
• （五） 萃取法提取样品的质谱研究结果85
• （六） 样品处理的溶剂优化85-87
• （七） 盐酸美金刚片降解实验物料守恒研究87-94
• 三、 小结与讨论94-95
• 第五章 盐酸美金刚片中杂质的限量测定95-132
• 第一节 概述95-97
• 第二节 实验部分97-132
• 一、 基于气相色谱法的盐酸美金刚片中杂质限量测定97-120
• （一） 材料和方法97-98
• （二） 方法学考察98-119
• （三） 限量测定119-120
• 二、 基于液相色谱法的盐酸美金刚片中杂质美金刚 乳糖结合物的限量测定120-131
• （一） 材料和方法120-121
• （二） 方法学考察121-130
• （三） 限量测定130-131
• 三、 小结与讨论131-132
• 全文总结132-133
• 参考文献133-138
• 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况138-139
• 致谢139

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：256188