磁性壳聚糖微球的制备及其分离降血压肽的研究

发布时间：2017-03-20 17:08

  本文关键词：磁性壳聚糖微球的制备及其分离降血压肽的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：长蛇鲻是我国主要经济鱼类之一,年产量大,其鱼肉蛋白质酶解后可得到体外对血管紧张素转化酶(ACE)具有抑制作用的降血压多肽,然而从酶解液中分离纯化降血压多肽是一个复杂繁琐的过程。本文以生物相容性良好的磁性壳聚糖微球作为固定化载体,偶联固定化猪肺粗提ACE作为亲和配基,对长蛇鲻酶解液中降血压肽组分进行分离纯化,为降血压肽分离纯化技术提供一定的技术支持和理论基础。 采用乳化交联法制备了磁性壳聚糖微球,并确定最优制备工艺条件为：醋酸溶液浓度为3%,壳聚糖溶液浓度为10mg·mL-1,水油相之比为1：6,搅拌速率为800rpm。对磁性微球进行性质表征可知,微球平均粒径为901nm,粒径均一,并包裹了Fe304磁性纳米粒子, Fe304含量约为28%,呈超顺磁性,磁响应性良好,可快速分离和富集。 采用环氧氯丙烷对磁性壳聚糖微球进行环氧基修饰活化,并确定最优活化条件为：NaOH溶液浓度为0.9mol·L-1,环氧氯丙烷体积分数为40%,NaBH4浓度为0.5g·L-1,反应温度为40℃,反应时间为4h。此时,微球表面环氧基密度可达159.23μmol·g-1,活化后的微球可应用于酶的固定化。 以环氧基活化的磁性壳聚糖微球为固定化载体,对猪肺粗提血管紧张素转化酶(ACE)进行固定化,并确定固定化最优工艺条件为：pH为8.3,反应温度为50℃,反应时间为1.5h,酶液蛋白浓度为6mg·mL-1最优条件下,固定化酶活力为0.048U·g-1。与游离酶相比,固定化酶pH稳定性、热稳定性均得到了提高,具有较好的重复操作稳定性和储藏稳定性。 以固定化ACE的磁性壳聚糖微球为亲和载体,对长蛇鲻酶解液中降血压多肽组分进行一步亲和吸附实验。研究结果表明,经亲和吸附后,酶解液ACE抑制率从71.50%提高到了82.06%。采用高效液相色谱对吸附前后酶液进行分析,色谱结果跟ACE抑制活性检测结果吻合,表明磁性壳聚糖亲和载体可应用于长蛇鲻中降血压多肽的快速分离纯化。
【关键词】：磁性 壳聚糖 复合微球 降血压肽 亲和吸附
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：O636.1
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 符号说明11-12
• 第一章 绪论12-23
• 1.1 磁性高分子微球12-14
• 1.1.1 磁性高分子微球简介12
• 1.1.2 磁性高分子微球组成与结构12-13
• 1.1.3 磁性高分子微球的特性13-14
• 1.2 壳聚糖14-15
• 1.3 磁性壳聚糖微球15-20
• 1.3.1 磁性纳米材料的制备方法15-16
• 1.3.2 磁性壳聚糖微球的制备方法16-18
• 1.3.3 磁性壳聚糖微球的应用18-20
• 1.4 降血压肽20-21
• 1.4.1 降血压肽概述20-21
• 1.4.2 降血压肽的分离纯化21
• 1.5 论文选题意义和主要研究内容21-23
• 第二章 磁性壳聚糖微球的制备及表征23-32
• 2.1 实验材料与仪器23-24
• 2.1.1 材料与试剂23
• 2.1.2 仪器与设备23-24
• 2.2 实验方法24-25
• 2.2.1 改性磁流体的制备24
• 2.2.2 磁性壳聚糖微球的制备24
• 2.2.3 磁性壳聚糖微球的表征方法24-25
• 2.3 结果与讨论25-31
• 2.3.1 磁性壳聚糖微球制备工艺条件优化25-28
• 2.3.2 磁性壳聚糖微球的表征28-31
• 2.4 本章小结31-32
• 第三章 磁性壳聚糖微球活化工艺研究32-39
• 3.1 实验材料与仪器32-33
• 3.1.1 材料与试剂32
• 3.1.2 仪器与设备32-33
• 3.2 实验方法33-34
• 3.2.1 磁性壳聚糖微球的活化33
• 3.2.2 磁性壳聚糖微球环氧基修饰密度的分析33-34
• 3.3 结果与讨论34-37
• 3.3.1 NaOH溶液浓度对微球环氧基活化密度的影响34
• 3.3.2 环氧氯丙烷体积分数对微球环氧基活化密度的影响34-35
• 3.3.3 NaBH_4浓度对微球环氧基活化密度的影响35-36
• 3.3.4 反应温度对微球环氧基活化密度的影响36-37
• 3.3.5 反应时间对微球环氧基活化密度的影响37
• 3.4 本章小结37-39
• 第四章 磁性壳聚糖微球固定化血管紧张素转化酶工艺优化39-48
• 4.1 实验材料与仪器39-40
• 4.1.1 材料与试剂39
• 4.1.2 仪器与设备39-40
• 4.2 实验方法40-41
• 4.2.1 血管紧张素转化酶(ACE)的提取40
• 4.2.2 血管紧张素转化酶(ACE)的固定化40
• 4.2.3 蛋白质含量的测定40-41
• 4.2.4 ACE活性检测方法41
• 4.3 结果与讨论41-47
• 4.3.1 蛋白质标准曲线41-42
• 4.3.2 马尿酸标准曲线42
• 4.3.3 磁性壳聚糖微球固定化ACE工艺条件研究42-45
• 4.3.4 固定血管紧张素转化酶的酶学性质45-47
• 4.4 本章小结47-48
• 第五章 磁性壳聚糖亲和微球分离降血压肽的工艺研究48-54
• 5.1 实验材料与仪器48-49
• 5.1.1 材料与试剂48
• 5.1.2 实验仪器48-49
• 5.2 实验方法49-51
• 5.2.1 亲和微球分离纯化ACEI组分49-50
• 5.2.2 蛋白质含量测定50
• 5.2.3 ACE抑制活性检测50
• 5.2.4 液相色谱条件50-51
• 5.3 结果与讨论51-53
• 5.3.1 吸附时间对蛋白吸附量的影响51
• 5.3.2 ACE抑制活性分析51-52
• 5.3.3 亲和吸附组分液相色谱分析52-53
• 5.4 本章小结53-54
• 第六章 结论与展望54-56
• 6.1 主要结论54-55
• 6.2 展望55-56
• 参考文献56-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间发表的学术论文64

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