破囊壶菌脂肪酶基因的克

发布时间：2017-10-11 02:31

  本文关键词：破囊壶菌脂肪酶基因的克隆、双温控自诱导表达及酶学性质研究

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【摘要】：【目的】克隆破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW7的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源高效表达,并进行初步酶学性质研究。【方法】基于转录组数据注释,获得脂肪酶基因lip,构建重组基因工程菌Rosetta(DE3)/p ET30-lip,利用双温控自诱导方法高效表达蛋白,表达产物(LIP)经Ni-Agarose His亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究。【结果】从Aurantiochytrium sp.PKU#SW7中克隆得到一个大小为873 bp的脂肪酶基因(Gen Bank登录号为KT305964),该酶对p-NPB最适反应温度和pH分别为40°C和8.0。以不同浓度的金属离子Ca~(2+)和Co~(2+)溶液分别保温处理酶液30 min可使酶活提高1.3倍左右;甲醇对脂肪酶的抑制作用不明显。在最适反应条件下对p-NPP与p-NPB的酶活力分别为70.0±3.1 U/mg和102.5±2.6 U/mg。【结论】Aurantiochytrium sp.PKU#SW7脂肪酶具有良好的特性,符合生物柴油生物催化剂基本要求。
【作者单位】： 北京大学环境与能源学院;
【关键词】： 破囊壶菌 脂肪酶 双温控自诱导表达
【基金】：海洋公益性行业科研专项经费项目(No.201305022) 国家外国青年专家基金项目(No.31450110424) 中国博士后科学基金项目(No.2014M560855) 深圳市海外高层次人才创新创业专项基金项目(No.KQCX201405211502553)~~
【分类号】：Q78;Q936
【正文快照】： 脂肪酶(Lipase,EC3.1.1.3)属于羧基酯水解酶类,α/β折叠水解酶超家族。脂肪酶广泛存在于人、动植物、微生物体中。由于微生物脂肪酶具有种类繁多、底物专一性类型多、产量可控性强、易分离纯化以及便于工业化生产等优点,成为国内外的研究热点。Hasan等[1]研究发现,微生物界可

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本文编号：1010023