利用CRISPR系统介导人类mir-505基因位点的编辑

发布时间：2017-10-14 08:32

  本文关键词：利用CRISPR系统介导人类mir-505基因位点的编辑

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【摘要】：目的:通过针对人源mir-505基因,设计不同sgRNA,从而利用CRIPSR系统对mir-505基因位点进行编辑,并探讨CRISPR系统对靶点的剪切效率的影响因素。方法:针对人源mir-505基因设计两条具有不同GC%的sgRNA,随后分别将其构建入41824-sgRNA表达载体和42230-Cas9蛋白/sgRNA共表达载体,并将表达载体利用脂质体转染法转染入人类细胞,通过T7E1assay检测不同CRISPR系统对靶点剪切效率的影响。结果:对靶点的剪切与Cas9蛋白和sgRNA的剂量成正比;当sgRNA与Cas9蛋白共传递时,也能够明显提高靶点的剪切效率;而较低的sgRNA的GC%会降低其对靶点的剪切效率。结论:本研究利用CRISPR系统靶向人源细胞的mir-505基因,使得mir-505基因发生突变。CRISPR系统对靶点的剪切效率和sgRNA和Cas9蛋白的剂量、sgRNA是否和Cas9蛋白共传递以及sgRNA的GC%有关。
【作者单位】： 东华大学生物科学与技术研究所;
【关键词】： CRISPR系统 Mir- SgRNA TE assay 剪切效率
【基金】：中央高校基本科研业务专项资金(13D110521)
【分类号】：Q78
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):Q291;R-33 Document code:AArticle ID:1673-6273(2016)02-257-04前言CRISPR被发现是一种细菌和古生菌的免疫系统[1-3],由一列短小的保守重复序列被具有相似大小的独特的DNA序列所间隔,一种独特的DNA序列叫做间隔区,这些间隔区通常来源于

【共引文献】

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本文编号：1030077