猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建

发布时间：2017-10-14 14:30

  本文关键词：猪瘟病毒亚基因复制子及其细胞系的构建

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【摘要】：为探索猪瘟病毒(CSFV)的复制机理,本实验在前期CSFV流行株GD53全基因组测序的基础上,利用新霉素抗性基因(Neor)替换病毒结构蛋白基因以构建CSFV GD53株的亚基因组复制子(GD53-SGR)。首先构建含有T7-5'UTR-N~(pro)-Neor-EMCV/IRES-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3'UTR的重组质粒pc DNA-GD53-SGR,将其利用T7 RNA聚合酶经体外转录制备的RNA转录本转染猪睾丸细胞系(ST)后,利用G418筛选含有GD53-SGR的ST细胞,构建ST-GD53-SGR细胞系。酶切鉴定及测序结果表明,重组质粒pc DNA-GD53-SGR构建正确,利用T7 RNA聚合酶体外转录后获得了与预期大小一致的GD53-SGR RNA。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定结果表明,获得了含有GD53-SGR的ST细胞系。本研究构建的CSFV ST-GD53-SGR细胞系有助于进一步了解CSFV非结构蛋白的功能,同时为CSFV的复制机制研究及抗病毒药物的研发奠定基础。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科技学院;军事医学科学院军事兽医研究所;湖南农业大学动物医学学院;
【关键词】： 猪瘟病毒 亚基因组复制子 ST细胞
【基金】：国家自然科学基金(31130052,31572528) 中国博士后科学基金面上项目(2013M532129)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,同时插入抗性基因及表达调控序列。最后所构建的CSFV)引起的猪的一种以高热、出血和免疫抑制为亚基因组复制子GD53-SGR全长为10 309 bp,包括特征的猪烈性传染病[1]。目前我国流行的猪瘟在临5'UTR、Npro(18 nt)、Neor、脑心肌炎

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