hGDF-15基因的克隆及原核表达

发布时间：2017-10-15 21:43

  本文关键词：hGDF-15基因的克隆及原核表达

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【摘要】：【目的】克隆人生长分化因子-15(Human growth differentiation factor-15,hGDF-15)成熟肽基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达,为hGDF-15药理活性和生物学功能研究奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆人hGDF-15成熟肽基因,将其连接到pET-28a载体上构建pET-28a-hGDF-15原核表达载体,并将此载体转入Rosetta(DE3)大肠杆菌感受态细胞,获得重组大肠杆菌,对目的蛋白分别采用不同温度(16,25,37℃)、IPTG浓度(0.10,0.25,0.50,0.75,1.00mmol/L)和时间(12,24,36,48h)进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,利用Gel Quant Express软件对菌体破碎离心的上清组分和沉淀组分中的蛋白含量进行测定,通过正交试验,分析上清组分和沉淀组分的最适诱导表达条件。【结果】成功获得hGDF-15成熟肽基因,其长度为339bp;构建了pET-28a-hGDF-15原核表达载体,并诱导表达了hGDF-15蛋白;优化的上清组分最适诱导条件为IPTG浓度0.25mmol/L、温度16℃、时间24h,沉淀组分最适诱导条件为温度37℃、时间36h、IPTG浓度1.00mmol/L。【结论】成功克隆了hGDF-15基因,在大肠杆菌中诱导表达出其编码蛋白,并优化出了最适诱导表达条件。
【作者单位】： 吉林农业大学生命科学学院;
【关键词】： 生长分化因子- 原核表达 IPTG浓度 诱导时间 诱导温度
【基金】：吉林省科技发展计划项目(20130101105JC,20140204018YY) 国家级大学生创新创业计划项目 吉林农业大学大学生科技创新基金项目
【分类号】：Q78;Q936
【正文快照】： 生长分化因子-15(Growth differentiation fac-tor-15,GDF-15),是TGF-β超家族成员,广泛分布于哺乳动物组织中,在多种病症(包括炎症、肿瘤、心血管疾病和肥胖)中扮演多重角色[1]。人GDF-15基因(hGDF-15)编码序列全长885bp,由2个外显子组成,其中外显子1由238bp的编码序列和71bp

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