编码基因完整的伪狂犬病毒细菌人工染色体的构建

发布时间：2017-10-17 17:21

  本文关键词：编码基因完整的伪狂犬病毒细菌人工染色体的构建

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【摘要】：为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶AcclⅠ处理过的病毒全基因组连同转移载体共同转染BHK21细胞,获得重组病毒;利用PCR检测、电镜观察及生长曲线测定对野毒与重组毒的基本特性进行了比较。结果表明:重组病毒可以稳定地表达绿色荧光,BAC在传代过程中能够稳定存在;重组病毒在电镜下的形态与野毒未见差异,其生长曲线也基本同野毒吻合。说明成功构建的编码基因完整的PRV细菌人工染色体可用于该病毒的结构生物学及致病机理研究。
【作者单位】： 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【关键词】： 伪狂犬病毒(PRV) 细菌人工染色体(BAC) 完整结构基因组 重组病毒 EGFP
【基金】：国家科技重大专项人兽共患病病原谱流行规律研究(2012ZX10004214)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： 伪狂犬病毒属于(PRV)疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科的猪疱疹病毒Ⅰ型病毒,成熟的病毒粒子由四部分独特的结构组成:双股线状DNA的核心、二十面体核衣壳、被膜以及外层的囊膜[1]。伪狂犬病毒的基因组为线状双链DNA,大小约为150 kb,GC含量约为74%,至少含70个基因,约编码100种蛋白质

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本文编号：1050077