GhWRKY44基因在烟草中遗传转化及功能分析

发布时间：2017-10-18 11:24

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【摘要】：为了进一步验证GhWRKY44(登录号:KJ801807)基因在烟草异位表达后的功能,构建了Ca MV35S启动子调控、Nos为终止子的棉花抗枯萎病相关基因(GhWRKY44)的过表达载体;电击法将其导入农杆菌GV3101,菌液PCR筛选鉴定阳性菌株,采用农杆菌介导法转化烟草;T0转化植株经卡那霉素筛选、PCR检测后,随机从转基因T0中选取5株进行RT-PCR检测,均为阳性株,说明GhWRKY44基因不仅整合到烟草基因组中而且还能正常转录。对过表达GhWRKY44基因的转基因烟草T1株系进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析。结果表明,在正常生长情况下,PR5和NPR1的表达量在转GhWRKY44株系中明显增加,枯萎病菌侵染后,在转GhWRKY44株系中,PR1a、PR2和NPR1的表达量迅速增加,明显高于野生型株系,而PR5的表达量则低于野生型株系,说明该目的基因能在烟草中异位表达并能激活病程相关蛋白基因的表达,但其功能仍需进一步研究。
【作者单位】： 石河子大学农学院;新疆农垦科学院生物技术研究所;
【关键词】： 烟草 GhWRKY 遗传转化 病程相关蛋白基因
【基金】：国家自然基金项目(31260358) 农业部转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08005-005)
【分类号】：S572
【正文快照】： 转录因子(Transcription factor,TF)是一类能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性结合,从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子,植物种属中的转录因子基因通常以家族的形式存在[1]。在植物的抗病性中,与防卫反应相关的转录因子有多种,如

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本文编号：1054645