双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆

发布时间：2017-10-18 21:39

  本文关键词：双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆

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【摘要】：为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125μg/m L,包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/m L,大豆蛋白体系中为8 ng/m L;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。
【作者单位】： 吉林省农业科学院植物保护研究所东北作物有害生物综合治理重点实验室吉林省农业微生物重点实验室;东北农业大学植物保护学院;吉林农业大学农学院;
【关键词】： Bar 双抗夹心酶联免疫吸附 大豆 检测
【基金】：吉林省自然科学基金项目(20130101089JC) 吉林省中青年科技领军人才及优秀创新团队项目(20121812) 国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08004)
【分类号】：S565.1
【正文快照】： 草丁膦是一种低毒除草剂,其有效成分为膦丝值对应的PAT蛋白单克隆抗体或组合为捕获抗体。检测菌素(phosphinothricin,PPT),Bar基因为抗除草抗体为实验室已制备保存的PAT蛋白兔源多克隆抗体,剂基因,编码膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin根据方阵滴度法确定捕获抗体和检测抗，

本文编号：1057298