菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鉴定

发布时间：2017-10-18 23:12

  本文关键词：菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鉴定

  更多相关文章： 菊花 烟草 DgWRKY5 DgWRKY4 基因表达 盐胁迫

【摘要】：菊花作为我国十大传统名花之一,除了有极高的观赏、药用、食用价值外,还有较高的经济价值,在世界各地广泛栽植,深受广大民众的喜爱。然而在菊花的生产实践过程中,常常受到如干旱、高盐等不利环境因子的影响,因此,培育耐盐性强的切花菊新品种成为菊花育种的重要目标之一。本实验以菊花为实验材料,基于新一代高通量测序技术Illumina HiSeq 2000对菊花转录组进行测序获得数据库,从中筛选出具有完整开放阅读框的基因,利用电子克隆和RT-PCR技术克隆得到新的WRKY类转录因子,分别命名为DgWRKY5和DgWRKY4,后通过农杆菌介导法转化菊花和烟草,分别获得了转DgWRKY5基因菊花和转DgWRKY4基因烟草。序列分析显示：DgWRKY5的开放阅读框为1603bp,编码540个氨基酸残基,基因编码蛋白质分子量为60.0KDa,等电点为7.07；对获得的转DgWRKY5基因菊花进行盐胁迫试验,在400mM NaCl盐胁迫条件下,野生型的菊花叶片比转基因菊花叶片发黄和萎蔫,而且叶绿素含量降低。序列分析显示：DgWRKY4的开放阅读框为1534bp,编码482个氨基酸残基,基因编码蛋白质分子量为53.6KDa,等电点为7.35；对获得的转DgWRKY4基因烟草进行表型观察发现：在正常情况下,野生型和4个转DgWRKY4基因株系在整个生命周期中表型无显著差异；对转DgWRKY4基因烟草进行盐胁迫试验,在150mM NaCl盐胁迫条件下,转基因烟草发芽率(58-60%)显著高于野生型的烟草(25%)。
【关键词】：菊花 烟草 DgWRKY5 DgWRKY4 基因表达 盐胁迫
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S682.11;Q943.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 缩略词表6-9
• 1. 文献综述9-19
• 1.1 植物转录因子简述9-11
• 1.1.1 植物转录因子的结构特点9-11
• 1.1.2 与植物逆境胁迫相关的转录因子11
• 1.2 WRKY类转录因子的研究进展11-18
• 1.2.1 WRKY类转录因子的演变11-12
• 1.2.2 WRKY类转录因子的结构特点12-13
• 1.2.3 WRKY类转录因子的功能13-17
• 1.2.4 WRKY类转录因子的作用机制17-18
• 1.2.5 WRKY类转录因子的调控机制18
• 1.3 研究的目的和意义18-19
• 2. 材料与方法19-28
• 2.1 植物材料19
• 2.2 试剂与仪器19-20
• 2.2.1 主要仪器设备19
• 2.2.2 主要分子生物学和化学试剂、表达载体及菌株19
• 2.2.3 实验中常用培养基和溶液配制19-20
• 2.3 试验方法20-28
• 2.3.1 取样20
• 2.3.2 RNA的提取和反转录20-22
• 2.3.3 DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的分离22-23
• 2.3.4 DgWRKY5基因和DgWRKY4基因表达载体的构建23-24
• 2.3.5 农杆菌感受态的制备24-25
• 2.3.6 重组质粒pCAMBIA 2300-DgWRKY5和重组质粒pCAMBIA2300-DgWRKY4转化农杆菌25
• 2.3.7 将含有DgWRKY5质粒的农杆菌通过介导法转化到菊花中25-26
• 2.3.8 将含有DgWRKY4质粒的农杆菌通过介导法转化到烟草中26-27
• 2.3.9 转DgWRKY5基因菊花和转DgWRKY4基因烟草的检测27-28
• 2.3.10 转基因菊花植株抗盐性的初步分析28
• 2.3.11 转基因烟草T0代植株表型观察和抗盐性初步分析28
• 2.3.12 菊花叶片叶绿素含量测定28
• 3. 结果与分析28-38
• 3.1 菊花DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的分离及DgWRKY5基因和DgWRKY4基因的进化关系分析28-34
• 3.2 DgWRKY5过量表达菊花植株的抗盐性分析34-37
• 3.3 DgWRKY4过量表达烟草植株的表型及抗盐性分析37-38
• 4. 讨论与结论38-40
• 4.1 讨论38-39
• 4.2 结论39-40
• 参考文献40-45
• 致谢45

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1 田效琴;菊花DgWRKY5及DgWRKY4基因的克隆和功能鉴定[D];四川农业大学;2016年

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本文编号：1057679