松墨天牛化学感受组织荧光定量PCR内参基因的鉴定与筛选

发布时间：2017-10-19 18:45

  本文关键词：松墨天牛化学感受组织荧光定量PCR内参基因的鉴定与筛选

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【摘要】：【目的】本研究拟选择适合用于分析松墨天牛Monochamus alternatus化学感受组织中基因表达的内参基因。【方法】依据转录组测序结果进行内参基因鉴定,利用RT-q PCR技术分析内参基因在松墨天牛不同发育阶段和不同性别化学感受组织间的表达差异,并利用软件ge Norm,Norm Finder和Best Keeper比较其表达的稳定性。【结果】松墨天牛转录组中鉴定出9个候选内参基因(Actin,TUB,18S rRNA,RPS27A,RPS3,RPL10,AK,GAPDH和EF1A),其中后7个候选内参基因在松墨天牛中被首次鉴定,松墨天牛候选内参基因和其他昆虫相应基因的同源性很高。9个候选内参基因引物均具有良好的扩增效率,18S rRNA的表达水平最高,EF1A的表达水平最低;18S rRNA和Actin在不同样品间的表达水平差异最大,GAPDH和TUB表达水平在不同样品间差异最小。ge Norm和Norm Finder软件分析认为,GAPDH是最稳定的内参基因,TUB是较为稳定的内参基因,18S rRNA和Actin是最不稳定的内参基因;Best Keeper软件分析认为,GAPDH和TUB是合适的内参基因,18S rRNA和Actin是不适合的内参基因。最适合校正松墨天牛化学感受组织中基因表达数据的内参基因数量为2个,即GAPDH和TUB,并且这样的内参基因组合可以用于不同发育阶段和不同性别的不同化学感受组织。【结论】本研究结果为利用RT-q PCR技术准确分析松墨天牛和其他天牛基因包括化学感受组织基因相对表达量的内参基因选择提供了重要参考。
【作者单位】： 温州医科大学健康与环境生态研究所;
【关键词】： 松墨天牛 内参基因 化学感受 发育 荧光定量PCR
【基金】：公益性行业(农业)科研专项基金(201203036)
【分类号】：S763.38
【正文快照】： 实时荧光定量反转录PCR(real-time quantitativereverse transcription-PCR,RT-q PCR)是分子生物学领域研究基因表达的最有效方法之一(Yan et al.,2012)。在RT-q PCR实验过程中,起始RNA质量、c DNA合成效率等方面的差异可能影响结果,为了去除这些影响因素,需要引入内参基因对

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本文编号：1062763