稳定表达NLRC5基因肝癌细胞株的建立

发布时间：2017-10-20 19:47

  本文关键词：稳定表达NLRC5基因肝癌细胞株的建立

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【摘要】：目的建立起能够稳定表达NLRC5基因的肝癌Hep G2细胞株。方法设计遗传霉素(G418)的浓度梯度,通过对Hep G2细胞筛选最终确定筛选药物浓度。将构建好的人源p EGFP-C2-NLRC5重组质粒利用脂质体介导法转染至Hep G2肝癌细胞株中,用G418筛选出耐药阳性克隆。通过免疫荧光技术观察绿色荧光蛋白稳定表达情况,Western blot法验证NLRC5蛋白表达情况。结果 G418在14 d内使Hep G2细胞全部死亡的最小浓度是300 ng/ml。用G418筛选瞬转p EGFP-C2-NLRC5 14 d在荧光显微镜下可见耐药克隆的形成。Western blot法检测显示,稳定过表达组NLRC5的蛋白水平比空质粒转染组高(t=15.356,P0.05)。结论成功构建稳定表达NLRC5基因的肝癌细胞株,为进一步研究NLRC5基因在肝癌的体内实验奠定了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;合肥瑶海区长淮街道社区卫生服务中心;
【关键词】： NLRC 肝癌 稳定细胞株 HepG
【基金】：国家自然科学基金(编号:81473268、81202978) 安徽省自然科学基金(编号:1308085MH145)
【分类号】：R735.7
【正文快照】： 2015-10-20接收肝细胞肝癌约占原发性肝癌的90%,已成为全世界最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在肿瘤相关死因中位列第三[1]。而肝癌的发生、发展主要与肝脏慢性炎症等免疫反应所导致的肝细胞反复损伤与增生密切相关[2-3],深入了解和掌握免疫反应的分子机制将为今后治疗与炎症相

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本文编号：1069009