大口黑鲈GHRH基因启动子区域序列分析及其活性检测

发布时间：2017-10-21 23:36

  本文关键词：大口黑鲈GHRH基因启动子区域序列分析及其活性检测

  更多相关文章： 生长激素释放激素 启动子活性 大口黑鲈

【摘要】：生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)是下丘脑弓状核合成和分泌的小分子多肽,其主要功能是调节垂体细胞合成和释放生长激素。为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH基因5’侧翼启动子区域的活性和该区域中潜在的转录因子对GHRH基因表达的调控作用,对该基因5’端启动子区域约1400 bp长度的片段进行序列分析,预测顺式作用元件,获得了Oct-1、SP1、NF-1、C/EBPalp和C/EBP等多个潜在的调控GHRH基因表达的调节因子结合位点序列。在包括外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区两侧加入两个限制性酶切位点Xho I和Bam H I,对其进行改造,并将该片段插入红色荧光蛋白报告基因载体p DsRed2-1,构建了重组表达质粒pGHRH1-RFP。同时,用不含有外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区构建重组表达质粒p GHRH-RFP。将质粒pGHRH1-RFP和p GHRH-RFP转染鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papillosum cyprinid,EPC)。经过48 h的培养,在pGHRH1-RFP转染的部分细胞中检测到红色荧光蛋白表达。又将pGHRH1-RFP或p GHRH-RFP质粒注射到斑马鱼(Danio rerio)一细胞或二细胞期的胚胎中,注射了pGHRH1-RFP的胚胎在受精后48 h约有22.5%能检测到有红色荧光蛋白表达,受精后72 h约有29%的仔鱼检测到红色荧光蛋白表达。实验结果表明,目前分离到的GHRH基因5’侧翼序列具有启动基因表达的活性,且该基因的内含子1和外显子1是启动子的活性所必需的。另外,pGHRH1-RFP质粒注射的斑马鱼胚胎只能在胚胎和仔鱼的脊椎和肌肉中检测到RFP的表达,而在脑中没有检测到表达。推测扩增到的大口黑鲈GHRH启动子序列1407 bp(-1043 bp~362 bp)只是起到了驱动RFP脊椎和骨骼肌表达的作用,而不包括驱动在脑组织中特异性表达的启动子,本研究为GHRH基因功能的深入分析奠定了基础。
【作者单位】： 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室;淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心;
【关键词】： 生长激素释放激素 启动子活性 大口黑鲈
【基金】：国家自然科学基金项目(31001107) 948计划重点项目(2011-G12) 广东省省级科技计划项目(2015A020209035) 国家科技支撑计划(2012BAD26B03)
【分类号】：S917.4
【正文快照】： 生长激素释放激素(growth hormone releasinghormone,GHRH)是一种小分子多肽,为PACAP/胰高血糖素(pituitary adenylate cyclase-activatingpolypeptide,PACAP/glucagon)超家族成员,主要由丘脑下部的弓状核合成和分泌[1-2],其主要的功能是通过与GHRH受体结合刺激垂体合成和分泌

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 任晓慧;乔继光;刘松财;张明军;章倩倩;侯峰;吕铁钢;周立光;吴琼;欧阳松应;张永亮;;基于RNA复制子GHRH基因表达载体的构建及在293细胞中的表达[J];畜牧兽医学报;2007年04期

2 柒启恩;习欠云;束刚;王丽娜;王松波;朱晓彤;高萍;江青艳;张永亮;;CST、GHRH、SS激素处理对猪腺垂体细胞GH分泌及GH基因mRNA表达的影响[J];畜牧与兽医;2012年S1期

3 程稳中;宋志强;辛彩霞;姬勇;李永刚;皮文辉;刘守仁;;肌注异位表达GHRH质粒对羔羊体重变化的影响[J];新疆农垦科技;2007年06期

4 杨文艳;杨连玉;王哲;;日粮铜源和水平对生长猪下丘脑SS、GHRH表达水平的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2009年17期

5 刘宏祥;姬改革;宋卫涛;单艳菊;徐文娟;陶志云;李慧芳;;鸭发育早期下丘脑GHRH、SS mRNA的表达[J];江苏农业学报;2014年02期

6 王杨;黄会岭;孙宝忠;刘艳军;孟庆勇;;导入外源GHRH基因质粒对犊牛健康的影响[J];上海畜牧兽医通讯;2007年04期

7 汪以真,颜新春,许梓荣;猪下丘脑生长激素释放激素(GHRH)基因克隆及用作DNA探针的研究[J];农业生物技术学报;2001年01期

8 马志杰;魏雅萍;钟金城;杨万远;常怀普;陈生梅;;藏绵羊GHRH基因部分片段的克隆及HaeⅢ-RFLP分析[J];河南农业科学;2008年02期

9 张海军;陈宏;房兴堂;张润锋;鲍斌;徐海霞;;山羊生长激素释放激素(GHRH)和抑制素βA(INH βA)基因多态性[J];农业生物技术学报;2007年05期

10 张文龙;;Ghrelin对莎能奶山羊下丘脑GHRH和SS mRNA表达的调节[J];动物医学进展;2009年11期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 戴建威;章倩倩;刘松财;丁景华;张永亮;;慢病毒载体介导GHRH基因在小鼠肌肉组织表达及对生长的影响[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

2 戴建威;章倩倩;刘松财;丁景华;张永亮;;AAV介导GHRH及HBsAg/SST基因对小鼠生长及血液激素水平的影响[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

3 任晓慧;张永亮;刘松财;戴建威;郝林琳;吕铁钢;章倩倩;侯峰;周立光;吴琼;卢可;齐建英;;基于RNA复制子的GHRH基因在小鼠内的表达[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第八次学术研讨会论文集[C];2008年

4 柒启恩;习欠云;束刚;王丽娜;王松波;朱晓彤;高萍;江青艳;张永亮;;CST、GHRH、SS激素处理对猪腺垂体细胞GH分泌及GH基因mRNA表达的影响[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年

5 任晓慧;张永亮;刘松财;戴建成;郝林琳;章倩倩;侯峰;吕铁钢;周立光;吴琼;卢可;齐剑英;;GHRH和SS双基因RNA复制子表达载体的构建及其在真核细胞中的表达[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年

6 任晓慧;张永亮;刘松财;戴建威;郝林琳;侯峰;章倩倩;吕铁钢;周立光;吴琼;卢可;齐建英;;基于RNA复制子的GHRH基因表达载体的构建及其在真核细胞中的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年

7 任晓慧;张永亮;刘松财;戴建威;郝林琳;章倩倩;侯峰;吕铁钢;周立光;吴琼;卢可;齐建英;;基于RNA复制子的GHRH和SS双基因表达载体的构建及其在真核细胞中的表达[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 兰云贤;GHRP-2对猪GH分泌的作用规律及促生长效果研究[D];四川农业大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 薛文静;BHBA对大鼠下丘脑GHRH表达和分泌的影响及其机制[D];吉林大学;2015年

2 张存芳;黄牛PTHRP、GHRH和GHRHR基因SNP及其与生长性状关联分析[D];西北农林科技大学;2008年

3 陈飞;新型人生长激素释放激素类似肽构效关系的研究[D];南方医科大学;2014年

4 王杨;导入外源GHRH基因质粒对犊牛生长性能和健康的影响[D];河北农业大学;2007年

5 杨大鹏;Calsarcin-1、GHRH基因多态性与4个中国黄牛品种生长及肉质性状的关联分析[D];西北农林科技大学;2009年

，

本文编号：1075789