Mir-132-3p靶向下调SOX4基因抑制肝癌细胞增殖、迁移侵袭的实验研究

发布时间：2017-10-23 13:04

  本文关键词：Mir-132-3p靶向下调SOX4基因抑制肝癌细胞增殖、迁移侵袭的实验研究

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【摘要】：目的:探讨mir-132-3p是否靶向调控SOX4基因(sex-determining region Y-box 4)抑制肝癌细胞增殖、迁移侵袭。方法:将hep G2细胞进行实验分组:正常对照组不接受任何处理;mimics对照转染组;hsa-mir-132 mimics实验转染组。采用实时荧光定量PCR检测hep G2细胞中mir-132-3p的表达量;同时采用实时荧光定量PCR和western blot检测hep G2细胞中SOX4 m RNA和蛋白质的表达水平;运用MTT检测24h、48h、72h hep G2细胞中各时期细胞增殖率情况;流式双标检测细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移情况;Transwell来检测肝癌细胞的侵袭。结果:(1)实时荧光定量PCR结果显示:hsa-mir-132 mimics转染组hep G2细胞mir-132-3p的表达水平为(3.001±0.218),明显高于正常对照组(0.930±0.102)和mimics转染组(0.910±0.088),差异具有统计学意义,P0.05。hsa-mir-132mimics转染组hep G2细胞中SOX4 m RNA的表达量(0.388±0.114),明显低于正常对照组(0.894±0.156)和mimics转染组(0.918±0.157),差异具有统计学意义,P0.05。(2)Western blot检测hep G2细胞中SOX4蛋白质的表达情况显示:hsamir-132 mimics转染组hep G2中SOX4/GAPDH的值为(0.180±0.045),明显低于正常对照组(0.647±0.032)和mimics转染组(0.663±0.032),差异具有统计学意义,P0.05。(3)MTT实验结果显示:以正常对照组24h、48h、72h细胞增殖率100%为参照,hsa-mir-132 mimics转染组hep G2细胞转染后24h、48h、72h细胞增殖率分别为91.77%、84.55%、76.68%,明显低于mimics转染组转染后24h、48h、72h细胞增殖率99.89%、99.94%、100.56%和正常对照组100%,差异具有统计学意义,P0.05。(4)流式检测结果显示:(1)细胞凋亡结果显示:hsa-mir-132 mimics转染组细胞凋亡率为(18.79±0.44)%,明显高于正常对照组(6.83±0.21)%和mimics转染组(6.01±0.25)%,差异具有显著性,P0.05。(5)划痕与Transwell的实验结果:(1)24h后hsa-mir-132 mimics转染组细胞迁移数为(41±19)个,明显低于正常对照组(232±38)个和mimics转染在(225±28)个,差异有统计学意义,P0.05。(2)hsa-mir-132 mimics转染组中hep G2细胞穿膜数量为(29±2)个,低于正常对照组(52±2)个和mimics转染组(51±1)个,差异有统计学意义,P0.05。结论:过表达Mir-132-3p很可能通过下调SOX4抑制肝癌细胞的细胞增殖、迁移侵袭。
【关键词】：hepG2 mir-132-3p SOX4 细胞增殖 侵袭
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩写词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-24
• 2.1 材料12-14
• 2.1.1 主要试剂和耗材12-13
• 2.1.2 主要器材13-14
• 2.2 研究方法14-23
• 2.2.1 细胞复苏14-15
• 2.2.2 细胞传代15
• 2.2.3 细胞转染15-16
• 2.2.4 实时荧光定量PCR检测hepG2中mir1323p和SOX4 mRNA的表达水平16-18
• 2.2.5 Western blot检测hepG2中SOX4蛋白质表达水平18-21
• 2.2.6 MTT实验检测hepG2增殖情况21-22
• 2.2.7 流式检测hepG2中细胞凋亡22
• 2.2.8 划痕实验检测hepG2细胞迁移22-23
• 2.2.9 Transwell检测hepG2细胞侵袭23
• 2.3 统计学方法23-24
• 第3章 结果24-32
• 3.1 各组hepG2中mir1323p和SOX4 mRNA表达水平24-25
• 3.1.1 mir1323p表达水平24
• 3.1.2 SOX4 mRNA的表达水平24-25
• 3.2 各组hepG2中SOX4蛋白质表达水平25-26
• 3.3 各组hepG2中细胞增殖率变化26-27
• 3.4 各组hepG2中细胞凋亡率27-29
• 3.5 各组hepG2中细胞迁移情况29-30
• 3.6 各组hepG2中细胞侵袭情况30-32
• 第4章 讨论32-35
• 第5章 结论与展望35-36
• 5.1 结论35
• 5.2 展望35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-40
• 综述 Mir-132 在肿瘤中的研究进展40-49
• 参考文献46-49

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本文编号：1083519