结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片

发布时间：2017-10-24 08:36

  本文关键词：结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片

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【摘要】：基因芯片(gene chip)是依据核酸杂交原理发展的一种生物新技术,在生命科学研究领域具有重要的应用价值。本研究将不对称PCR和基因芯片两种技术相结合,构建了同步检测鸡(Gallus gallus)传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的共检基因芯片。分别选取ILTV的胸苷激酶(thymidine kinase,TK)和糖蛋白B(glycoproteins B,g B)基因、NDV的融合蛋白(fusion,F)和血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemagglutinin-neuraminidase,HN)基因以及IBV的膜蛋白(membrane,M)和核衣壳(nucleocapsid,N)基因设计引物,从重组质粒菌中扩增制备探针基因,用乙醇沉淀法纯化后点制于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;靶基因用cy3标记引物,进行不对称PCR扩增,扩增的荧光标记单链产物与芯片杂交。不对称PCR结果显示,当限制性引物与非限制性引物浓度比例在1∶10时ILTV-TK、NDV-HN和IBV-N的单链产物增加最多,当浓度比在1∶20时,ILTV-g B、NDV-F和IBV-M的单链产物增加最多;相应的标记样品与3种病毒检测芯片杂交后,均出现较强的杂交信号,而阴性对照检测不到荧光信号,灵敏性实验表明,当DNA浓度为1.8×104拷贝时杂交仍为阳性。本研究构建的诊断基因芯片对12份临床样品进行初步应用检测,与PCR检测技术检出率基本一致。本实验所建立的联合检测基因芯片能够快速、准确、高通量的诊断NDV-IBV-ILTV,可以应用于集约化养殖业中对多种鸡疫病病毒的检测。
【作者单位】： 四川农业大学动物医学院/动物传染病与基因芯片实验室;崇州市农村发展局;
【关键词】： 鸡 新城疫病毒(NDV) 传染性喉气管炎病毒(ILTV) 传染性支气管炎病毒(IBV) 不对称PCR 芯片构建
【基金】：公益性行业(农业)科研专项项目(No.201203056)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： *同等贡献作者新城疫(Newcastle disease,ND)是一种禽类急性高度接触性传染病,主要特征是高致病性和隐性感染,呼吸困难、神经症状、内出血、腺胃出血及对应相关淋巴组织坏死等症状(Hu et al.,2010)。鸡(Gallus gallus)传支病(infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管病毒变

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 赵胤泽;汪琳;邢佑尚;张灿;;非洲马瘟病毒、西尼罗病毒和马冠状病毒的基因芯片检测技术研究[J];中国畜牧兽医;2012年10期

2 曹三杰;文心田;肖驰;张焕容;杨利;肖国生;黄小波;;几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用[J];畜牧兽医学报;2006年04期

3 陶启蒙;王秀荣;武嘉男;石霖;李雁冰;包红梅;陈化兰;;不对称RT-PCR结合芯片技术鉴别4种禽病的初步研究[J];中国预防兽医学报;2008年12期

4 曹三杰;文心田;肖驰;张焕容;肖国生;杨利;;应用基因芯片技术检测禽4种主要疫病的研究 Ⅱ.检测基因芯片的构建及制备[J];中国兽医学报;2007年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 戴亚斌;何农跃;刘梅;;基因芯片技术及其在微生物检测中的应用[J];动物医学进展;2006年10期

2 李中华;史惠;周毅;杨得胜;曹波;;鸡传染性支气管炎实验室诊断方法研究进展[J];动物医学进展;2008年01期

3 杨泽晓;韩雪清;王印;姚学萍;杨增岐;张彦明;汪开毓;;猪圆环病毒2型不对称PCR检测方法的建立[J];动物医学进展;2011年02期

4 朱丽萍;颜世敢;;动物病原高通量检测技术[J];动物医学进展;2011年10期

5 杜景娇;薛强;邹明强;郭浩;滕文锋;;禽流感病毒检测技术的研究新进展[J];中国畜牧兽医;2012年05期

6 唐庆冬;王金亮;包静楠;蒲娟;;RT-PCR技术在家禽传染病检测中的应用[J];黑龙江畜牧兽医;2012年13期

7 王青;张改平;赵森林;王选年;胡建和;王自良;杨苏珍;鲁晓翠;肖治军;;鸡新城疫病毒分子生物学特性及检测方法研究进展[J];河南农业科学;2007年05期

8 王玉洁;;基因芯片在禽流感病毒检测中的应用研究进展[J];江苏农业科学;2009年03期

9 舒燕;王升平;邬理洋;曾艳;周映华;胡新旭;高书峰;刘惠知;;畜禽养殖场病原微生物气溶胶检测与防控研究进展[J];湖南农业科学;2014年19期

10 肖驰;曹三杰;文心田;张焕容;肖国生;黄小波;;PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片构建研究[J];畜牧兽医学报;2006年08期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 戴亚斌;刘梅;何农跃;;基因芯片技术在微生物检测中的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

2 颜世敢;朱丽萍;;动物病原高通量检测新技术[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 鲜思美;水禽重要疫病的多重PCR与基因芯片检测技术研究[D];四川农业大学;2009年

2 郭焕成;猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒寡核苷酸芯片的研究与应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 乾义柯;葡萄金黄化植原体基因芯片检测技术及RFLP分析的研究[D];新疆农业大学;2010年

2 蔡绪禹;10种致脑炎病毒的基因芯片检测方法建立[D];中国农业科学院;2011年

3 张宝存;养殖对虾病毒性流行病学调查及高通量基因检测芯片的研究[D];中国海洋大学;2011年

4 吕丽萍;鸡新城疫病毒地方流行株的分离鉴定及免疫程序的试验研究[D];广西大学;2011年

5 孙庆歌;六种动物源性人兽共患病病毒基因芯片检测方法的研究[D];中国农业科学院;2009年

6 冯兴;益生芽孢杆菌PAS38在肉鸡肠道中的消长规律及对肠道菌群调节作用研究[D];四川农业大学;2009年

7 郑亚红;朱瀗新城疫病毒的分离鉴定及其F基因的序列分析[D];西北农林科技大学;2009年

8 樊荣;新城疫病毒陕西株的分离鉴定及其F基因的序列分析[D];西北农林科技大学;2009年

9 闫丽;海水鱼类主要弧菌基因芯片检测技术的优化[D];河北大学;2009年

10 陶鸽;中药复方制剂对鸡肾型传染性支气管炎的防治研究[D];扬州大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郭丽,王健伟,洪涛;冠状病毒分子生物学研究进展[J];病毒学报;2003年04期

2 李瑶,陈菊祥,裘敏燕,应康,陈沁,符薇,王品,沈娴,谢毅,毛裕民;基因芯片的制备研究[J];第二军医大学学报;2000年09期

3 孙朝晖,郑文岭,张宝,石嵘,马文丽;基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究[J];第一军医大学学报;2004年01期

4 曾昭文;花群义;段纲;;非洲马瘟病毒分子生物学研究进展[J];动物医学进展;2006年10期

5 李富祥;杨仕标;艾军;周晓黎;赵文华;王金萍;;非洲马瘟病毒VP7基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达[J];中国畜牧兽医;2012年01期

6 王蜀燕,郑文岭,周珏宇,丁大鹏,徐秋林,张海燕,彭翼飞,石嵘,马文丽;一种用于微阵列分析的通用引物U_2联合标记方法(英文)[J];解剖学报;2005年03期

7 杨忠苹;王秀荣;田丽娜;王煜;陈化兰;;利用基因芯片技术区分禽流感病毒主要亚型[J];微生物学报;2008年07期

8 顾炳泉 ,张常印 ,李建 ,张敬友 ,刘文斌 ,李雪梅;马冠状病毒研究进展[J];检验检疫科学;2005年02期

9 周文明,赵建龙,曹慧敏,张学军;三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响[J];安徽医科大学学报;2003年06期

10 秦智锋,钟安清,杨宝华,叶奕优;用基因芯片鉴别诊断四种水泡性疾病[J];中国病毒学;2003年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 严广斌;;基因芯片[J];中华关节外科杂志(电子版);2010年04期

2 许国平;基因芯片──生物技术的一项重大突破[J];世界科学;1997年09期

3 米兰;基因芯片──一门即将诞生的新兴工业[J];中国经贸导刊;1998年19期

4 杨彬;基因芯片:钱景诱人的微型实验室[J];中国科技信息;1999年Z4期

5 李梅浠;;基因芯片撬动的产业[J];新知客;2008年04期

6 吕秀齐;基因芯片——新世纪医学领域的“宠儿”[J];百科知识;1999年09期

7 李瑶,陈菊祥,裘敏燕,应康,陈沁,符薇,王品,沈娴,谢毅,毛裕民;基因芯片的制备研究[J];第二军医大学学报;2000年09期

8 邹宗亮,王升启,王志清;基因芯片制备方法研究进展[J];生物技术通报;2000年01期

9 徐伟文,李文全,毛裕民;表达谱基因芯片[J];生物化学与生物物理进展;2001年06期

10 田纯见;基因芯片在生物制药和预防兽医学上的应用前景[J];广东畜牧兽医科技;2001年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 申琦;石伟民;梅桢;;基因芯片数据解析算法研究[A];第十届全国计算(机)化学学术会议论文摘要集[C];2009年

2 周鲁卫;;基因芯片研究开发的基础[A];2000上海科技论坛BIO-X研讨会暨中德医学生物物理和上海流变学研讨会论文集[C];2000年

3 刘丽玲;王秀荣;陈化兰;;基因芯片的研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（上）[C];2003年

4 郝麟;朱平;于晓梅;张大成;欧阳建华;赵新生;;PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年

5 白志军;舒文杰;谢红卫;伯晓晨;林汝仙;王升启;;微生物检测基因芯片探针的遗传优化设计[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

6 孙啸;谢建明;陆祖宏;;高密度基因芯片设计和信息分析[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

7 郝麟;朱平;于晓梅;张大成;欧阳贱华;赵新生;;PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年

8 单金英;张能辉;;探针随机性分布对基因芯片纳米力学行为的影响[A];中国生物医学工程进展——2007中国生物医学工程联合学术年会论文集（下册）[C];2007年

9 金圣华;刘学军;张礼;;Affymetrix基因芯片原始数据噪声分析与应用[A];中国生物医学工程学会成立30周年纪念大会暨2010中国生物医学工程学会学术大会青年优秀论文[C];2010年

10 杨耀;程璐;陆祖宏;;多样本多位点SNP检测基因芯片的研究[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 平安证券综合研究所 马超 高利;基因芯片：方寸之间天地宽[N];中国证券报;2000年

2 周向东;基因芯片：神奇的医生[N];中国医药报;2001年

3 赵亚萍;家畜基因芯片在美问世[N];科技日报;2003年

4 《金周刊》记者 朱杰;基因芯片：窥见巨额利润[N];中国经营报;2001年

5 廖怀凌;基因芯片可预测“未病之病”[N];中国商报;2000年

6 本报记者 熊燕;基因芯片,百姓受益的检测技术[N];云南日报;2012年

7 记者 何少强;基因芯片生产实现产业化[N];广东科技报;2000年

8 胡育新 黄重华 王红阳;基因芯片技术[N];黑龙江日报;2000年

9 吴映红;基因芯片成为开发热点[N];中国电子报;2001年

10 记者 蒋建科;我国研制成功新型基因芯片[N];人民日报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 吴清华;基因芯片载体的表面化学处理及核酸固定技术研究[D];第一军医大学;2005年

2 王川;基因芯片数据管理及数据挖掘[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2004年

3 徐晓静;新发肠道致病菌检测基因芯片的研制及初步应用[D];内蒙古农业大学;2005年

4 吴飞珍;基因芯片数据的聚类功能评价算法和判别分析算法研究[D];上海大学;2009年

5 徐兆华;基因芯片数据统合分析方法的若干拓展[D];浙江大学;2010年

6 张宝;SH-SY5Y细胞基因表达谱芯片的制备及其应用研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年

7 周东蕊;5'CpG岛甲基化检测基因芯片的研究[D];南京农业大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 谢松e，

本文编号：1087962