稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究

发布时间：2017-10-26 12:13

  本文关键词：稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株构建的试验研究

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【摘要】：目的研究构建可以稳定表达HBx和MicroRNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法。方法采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株(LE/6),以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为p EGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为p EGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体p EGFP-Nl,作为p EGFP-NI质粒组。最后将Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 p EGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28%,且表达程度强;Pre-MicroRNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,p EGFP-HBx组内MicroRNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于p EGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义(P0.05)。结论本研究成功地构建了稳定表达HBx和MicroRNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础。
【作者单位】： 赣南医学院第一附属医院急诊外科;
【关键词】： HBx MicroRNA-基因 肝卵圆细胞 大肠埃希菌DHa 质粒载体pEGFP-Nl
【基金】：江西省自然科学基金资助项目(2012ZBAB205001) 江西省科技厅支撑计划项目(20112BBG70037) 江西省赣州市指导性科技计划任务(2011)
【分类号】：R735.7
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(HBV)感染是原发性肝癌(肝癌)的重要危险因素,HBV基因结构中包括S、C、P与X 4个开放阅读框,可起到反转录激活作用,激活大部分的病毒与肿瘤基因,直接作用于肝癌的发生、发展,而Micro RNA属于内源性非编码小RNA,影响肿瘤的发生、发展[1-2]。近来有研究表明,在多种肿

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本文编号：1098629