热应激过程中虹鳟热休克蛋白基因HSP40和HSP90β mRNA表达变化

发布时间：2017-10-29 00:08

  本文关键词：热应激过程中虹鳟热休克蛋白基因HSP40和HSP90β mRNA表达变化

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【摘要】：虹鳟(Oncorhynchus mykiss)属于典型的冷水性鱼类,对高温的耐受能力差,其适宜生长的温度范围为12℃~18℃。为了明确虹鳟热应激反应的调控机制,本研究采用Real-time FQ-PCR(fluorescent quantitative polymerase chain reaction)方法,对热应激前(18℃,0 h)、25℃持续热应激2 h、4 h、8 h和12 h以及应激后恢复6 h(18℃,HSR)的虹鳟鳃、肝脏、脾脏、心脏、头肾和全脑等6种组织中HSP40和HSP90βmRNA表达变化进行了检测分析。具体结果如下:1.热应激前,心脏和脑组织中HSP40和HSP90βmRNA表达量均比较高(P0.05);25℃热应激可上调虹鳟各组织中HSP40和HSP90βmRNA的表达量,在持续热应激过程中,HSPs均表现为先上升后下降的趋势。2.热应激过程中,HSP40在心脏组织的表达量最高,其次为肝脏组织和脑组织。鳃组织HSP40 mRNA表达量在2 h达到最大值,心脏、肝脏、脾脏、头肾和脑组织均在4 h达到最大值。3.热应激过程中,HSP90β在心脏组织中表达量最高,其次为脑组织和肝组织。心脏和脾脏组织中HSP90βmRNA表达量均在4 h达到最大值,脑组织中在8 h达到最大值,鳃、肝脏和头肾组织中均在12 h达到最大值。4.与热应激前相比,热应激过程中HSP40和HSP90βmRNA表达量的上调倍数最大的组织均为脾脏组织,说明脾脏组织对热刺激最为敏感。5.热应激过程中,心脏、脑和肝脏中HSP40、HSP90β的表达量均较高;热应激恢复后,心脏和脑组织中的HSP40未恢复到热应激前水平,肝脏和脑组织中的HSP90β未恢复到热应激前水平。推测心脏、脑和肝这些组织可能重点受到保护,并在热压力消除后,其恢复较为缓慢。
【关键词】：虹鳟 热休克蛋白 热应激 HSP40 HSP90β mRNA FQ-PCR
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4
【目录】：

• 摘要4-5
• Summary5-10
• 第一章 文献综述10-24
• 1 虹鳟的生物学特性10-11
• 1.1 形态特征10-11
• 1.2 生态习性11
• 1.3 繁殖习性11
• 2 应激11-13
• 2.1 应激的概念11-12
• 2.2 鱼类养殖生产中常见的应激源12
• 2.3 鱼类的应激反应12-13
• 2.4 热应激13
• 3 HSPs的简述13-18
• 3.1 HSPs及其发现过程13-14
• 3.2 HSPs分类14
• 3.3 HSPs生物学特性14-15
• 3.4 HSPs主要生物学功能15-16
• 3.5 HSPs的基因表达调节16
• 3.6 鱼类HSPs国内外研究现状16-17
• 3.7 HSP40及HSP9017-18
• 4 Real-time FQ-PCR分析技术18-24
• 4.1 Real-time FQ-PCR原理19-20
• 4.2 Real-time FQ-PCR中荧光标记方法的分类20-21
• 4.2.1 非特异性的DNA结合染料法20
• 4.2.2 特异性荧光定量PCR20-21
• 4.3 Real-time FQ-PCR定量分析方法21-22
• 4.3.1 相对定量分析21-22
• 4.3.2 绝对定量分析22
• 4.4 Real-time FQ-PCR技术的应用22-24
• 第二章 材料与方法24-36
• 1 试验材料24-26
• 1.1 试验动物24
• 1.2 主要仪器设备及试剂24-25
• 1.2.1 主要仪器设备24-25
• 1.2.2 普通试剂25
• 1.2.3 分子生物学试剂25
• 1.3 溶液配制25-26
• 1.3.1 RNA提取试剂配制26
• 1.3.2 琼脂糖凝胶电泳相关溶剂配制26
• 2 试验方法26-33
• 2.1 热应激处理及其采样26-27
• 2.2 总RNA的提取方法27-28
• 2.3 RNA浓度及纯度检测28-30
• 2.3.1 琼脂糖凝胶电泳检测28-29
• 2.3.2 采用超微量分光光度计检测29-30
• 2.4 cDNA第一条链合成30-31
• 2.4.1 基因组DNA的除去反应30
• 2.4.2 反转录反应30-31
• 2.5 引物设计与合成31-32
• 2.6 普通PCR反应筛选扩增条件32
• 2.7 Real-time FQ-PCR32-33
• 3 数据统计处理33-36
• 第三章 结果与分析36-45
• 1 总RNA提取质量36
• 2 普通PCR扩增产物36-38
• 3 Real-time FQ-PCR动力学曲线38-39
• 4 Real-time FQ-PCR熔解曲线39-40
• 5 HSP40 mRNA表达差异40-42
• 5.1 HSP40 mRNA组织表达差异40-41
• 5.2 同一组织HSP40 mRNA随应激时间表达变化41-42
• 6 HSP90β mRNA表达差异42-45
• 6.1 HSP90β mRNA组织表达差异42-43
• 6.2 同一组织HSP90β mRNA随应激时间表达变化43-45
• 第四章 讨论45-50
• 1 热应激对虹鳟各组织HSP40和HSP90β mRNA表达水平的影响45-50
• 1.1 热应激下虹鳟鳃组织HSP40和HSP90β mRNA的表达45-46
• 1.2 热应激下虹鳟脑组织HSP40和HSP90β mRNA的表达46-47
• 1.3 热应激下虹鳟肝脏组织HSP40和HSP90β mRNA的表达47-48
• 1.4 热应激下虹鳟心脏组织HSP40和HSP90β mRNA的表达48-49
• 1.5 热应激下虹鳟脾脏和头肾组织HSP40和HSP90β mRNA的表达49-50
• 第五章 结论50-51
• 参考文献51-58
• 致谢58-59
• 作者简介59-60
• 导师简介60-61

【参考文献】

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本文编号：1110525