HIF-1α基因介导的牙髓干细胞血管向分化的体外研究

发布时间：2017-10-30 01:14

  本文关键词：HIF-1α基因介导的牙髓干细胞血管向分化的体外研究

  更多相关文章： HIF-1α DPSCs 慢病毒转染 成血管

【摘要】：目的将HIF-1α基因稳定转染至牙髓干细胞(DPSCs)中,运用基因工程技术,检测HIF-1α基因诱导DPSCs在体外的成血管分化的作用。方法对HIF-1α进行402、564、和803位点的基因突变,使其在常氧状态下实现稳定表达并且能够保持高度活性,构建突变型、野生型以及对照组的慢病毒载体;体外培养DPSCs;分别用3种慢病毒转染DPSCs后,检测细胞转染效率、目的基因HIF-1α在m RNA及蛋白水平的表达,MTT检测慢病毒载体对细胞增殖的影响;目的基因转染成功后,分别于0,1,4,7,14,21天收集细胞,q PCR、Western blot法检测HIF-1α调控DPSCs成血管相关因子的基因和蛋白表达情况,并比较三种慢病毒载体对DPSCs作用的区别。结果DPSCs转染病毒MOI值设定为10 pfu/cell,转染病毒7 d后,倒置荧光显微镜观察病毒转染效果最好,此时转染效率达90%以上。MTT结果表明突变组和野生组吸光值高于对照组,而突变组又大于野生组,HIF-1α基因还有促进DPSCs增殖的作用。通过q PCR和Western blot的检测方法从基因和蛋白水平验证了目的基因HIF-1α的成功表达。目的基因转染成功后,分别于0,1,4,7,14,21天收集细胞,q PCR、Western blot法检测结果显示HIF-1α能够上调DPSCs成血管相关因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)的基因和蛋白表达(P0.05)。突变组和野生组的成血管作用明显强于对照组(P0.05),而突变组又优于野生组(P0.05)。结论本实验在体外从基因和蛋白水平检测并证明了HIF-1α能够诱导DPSCs促血管生成因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)表达的增加。初步证实了HIF-1α基因可以促进DPSCs血管向分化作用。
【关键词】：HIF-1α DPSCs 慢病毒转染 成血管
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R781
【目录】：

• 中英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-16
• 2 材料与方法16-20
• 2.1 主要设备和材料16-17
• 2.2 慢病毒载体Lenti-MT、Lenti-WT及Lenti-Lac Z的构建17
• 2.3 DPSCs的培养和分离17-18
• 2.4 HIF-1α 基因转染DPSCs最佳MOI值的测定18-19
• 2.5 MTT比色分析慢病毒对DPSCs细胞增殖水平的影响19
• 2.6 q PCR测定目的基因HIF-1α 以及成血管相关因子（VEGF、SDF-1、Ang-2）的m RNA的表达19
• 2.7 Western blot法检测HIF-1α 蛋白以及成血管相关蛋白（VEGF、SDF-1、Ang-2）的表达19-20
• 2.8 统计学处理20
• 3 结果20-22
• 3.1 细胞转染效率检测20
• 3.2 慢病毒转染对DPSCs增殖的影响20-21
• 3.3 目的基因检测21
• 3.4 HIF-1α 促进DPSCs成血管因子m RNA表达的检测21
• 3.5 HIF-1α 促进DPSCs成血管因子蛋白表达的检测21-22
• 4 讨论22-26
• 5 结论26-27
• 参考文献27-33
• 附图33-38
• 附录38-39
• 致谢39-40
• 综述40-50
• 参考文献47-50

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本文编号：1115463