猪流行性腹泻病毒S1基因的截段克隆表达及其在卵黄抗体制备上的应用

发布时间：2017-10-31 03:16

  本文关键词：猪流行性腹泻病毒S1基因的截段克隆表达及其在卵黄抗体制备上的应用

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【摘要】：通过RT-PCR技术扩增了猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1截段基因序列,将扩增的S1基因截段克隆到原核表达载体pET-32α(+)中,构建了重组表达质粒pET-32α-S1,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果显示:重组菌可表达相对分子质量为45 000的融合蛋白,蛋白表达量较高;Western blotting结果显示,表达的S1蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的S1蛋白具有良好的反应原性;将纯化后的S1蛋白与蜂胶佐剂按比例混合,作为免疫抗原,免疫产蛋鸡,每隔2周免疫1次,共免疫3次,定期利用ELISA方法检测抗体效价水平,琼脂扩散试验抗体效价最高达到1∶64,收集并纯化卵黄抗体(IgY),SDS-PAGE结果分析纯化效果较好;在人工感染仔猪试验中,卵黄抗体试验组的治愈率为100%,说明卵黄抗体对猪流行性腹泻病具有较好的治疗效果。结果表明:表达的重组S1蛋白具有良好的抗原性,作为免疫抗原免疫产生的卵黄抗体具有较高的抗体效价,为进一步研制猪流性腹泻卵黄抗体生物制剂奠定了基础。
【作者单位】： 山东农业大学;山东省滨州畜牧兽医研究院;
【关键词】： 猪流行性腹泻病毒 S基因 抗原性分析 卵黄抗体
【分类号】：S852.651
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:bzshenzq@163.com猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic di-arrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性的消化道传染病[1],主要引起呕吐、水样腹泻、脱水以及仔猪的高病死率。PEDV属于尼多病毒目(Ni

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本文编号：1120548