新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达

发布时间：2017-11-01 11:25

  本文关键词：新疆多浪羊IL-1β基因原核表达载体的构建与表达

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【摘要】：【目的】构建新疆多浪羊IL-1β基因编码区的原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,为进一步研究IL-1β蛋白的结构功能奠定基础。【方法】从含质粒pMD-18T-IL-1β的大肠杆菌DH5α中获取IL-1β基因,与pET-28b质粒DNA连接,构建原核表达载体pET-28b-IL-1β。先将其转化到克隆载体E.coli DH5α感受态细胞中大量拷贝,经菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后,提取pET-28b-IL-1β质粒转化到表达载体E.coli BL21(DE3)中,再次进行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定。将阳性单克隆接种于LB液体培养基,以终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导,用SDS-PAGE电泳检测IL-1β蛋白的表达及存在形式,通过Western blotting验证表达产物是否为目的蛋白。【结果】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,该载体经诱导后表达出融合蛋白,分子质量为32.4ku,主要以包涵体的形式表达;经Western blotting检测,带有6×His标签的融合蛋白有很好的反应原性。【结论】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,其在大肠杆菌BL21(DE3)中经诱导后表达出分子质量约为32.4ku的IL-1β融合蛋白。
【作者单位】： 塔里木大学生命科学学院;塔里木大学动物科学学院;新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室;
【关键词】： 多浪羊 IL-β基因 原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目“棉酚对新疆多浪羊白细胞介素表达的影响研究”(30960277) 创新群体项目“南疆地区羊标准化养殖的群发病防控及预警响应机制研究”(TDZKCX201401)
【分类号】：S826
【正文快照】： 新疆多浪羊是新疆南疆特色肉羊品种,其个体大、增重快,适合农区饲养,羔羊可当年育肥并屠宰,并具有耐干旱、耐热、耐低营养水平及抗逆、抗病、适应性强等优良性状,对荒漠化、半荒漠化等恶劣生态环境有较高的适应性。白细胞介素(Interleukin,IL)是重要的细胞因子之一,IL-1有2种

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本文编号：1126633