利用锁核酸化学偶联FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的体外实验

发布时间：2017-11-05 18:31

  本文关键词：利用锁核酸化学偶联FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的体外实验

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【摘要】：乙肝病毒(HBV)是有缺口的双链DNA病毒,侵入人体肝细胞后形成共价闭合环状DNA(ccc DNA)持续复制,并在逆转录过程中随机整合入宿主基因组。慢性乙型肝炎感染者平均每个细胞中含有33个ccc DNA拷贝,半衰期长达35~57 d,很难从体内彻底清除。利用锁核酸抑制HBV转录,是乙肝治疗的新策略。此外,利用基因组编辑技术靶向切割HBV基因组,有望从源头治愈乙型肝炎。基于锁核酸与双链DNA形成三股螺旋的能力、抵御核酸酶及聚合酶的稳定性以及对单碱基错配的敏感性,本研究以靶向切割乙型肝炎病毒为例,设计构建锁核酸修饰的寡核苷酸作为DNA结合域,有效增强对靶基因的特异性识别;同时利用FokⅠ核酸酶分子量小、二聚化时才具有酶活等特点,设计构建FokⅠ切割域二聚体重组蛋白作为DNA切割域;进而通过双功能交联剂GMBS,建立了5′端氨基(-NH2)修饰的锁核酸与N端巯基(-SH)修饰的FokⅠ核酸酶定向化学偶联的方法,并在体外验证了新型工具对HBV基因的靶向切割。该方法为此后在体内进行高特异性、无整合风险的抗病毒基因治疗提供了全新的技术思路。
【作者单位】： 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室;上海近岸科技有限公司;生工生物工程(上海)股份有限公司;
【分类号】：R373.21;Q78
【正文快照】： 乙型肝炎是由乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的肝脏炎性病变,可转化为肝硬化或肝癌。全球约有2.4亿人是慢性乙型肝炎感染者,我国属乙型肝炎高发区,一般人群HBs Ag阳性率为9.09%。HBV基因组全长3.2 kb,在侵入细胞核后形成共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA

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本文编号：1145368