转抗菌肽PR39基因小鼠的制备及研究

发布时间：2017-11-07 21:14

  本文关键词：转抗菌肽PR39基因小鼠的制备及研究

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【摘要】：抗菌肽作为动物体先天免疫系统的重要组成部分,具有广谱抗细菌、真菌、病毒等病原微生物及抗肿瘤的作用。它与抗生素相比,具有易降解,不易导致药物残留,且不易使细菌产生耐药性等优势,因此有望成为抗生素新的替代品。抗菌肽目前一般作为饲料添加剂的形式应用于畜牧行业,但它的活性在生产、储存和运输过程中容易下降,并且它在饲料中的添加增加了养殖成本。利用转基因技术,使动物体表达内源抗菌肽来提高其抗病力是解决上述问题的一条有效途径。本研究选用猪源抗菌肽PR39(proline-arginine-rich 39-amino acid peptide),构建了PR39表达载体pCMS-EGFP-PR39,在体外培养细胞中验证了其表达和功能,经原核显微注射法,制备了8只F0代转PR39基因小鼠,分析了EGFP标记基因和PR39基因在转基因小鼠中的表达和遗传情况,并通过人工感染猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus P1europeumoniae/APP),比较了转PR39基因小鼠与其同窝的野生型小鼠之间的抑菌能力差异。主要结果如下:(1)pCMS-EGFP-PR39载体能在体外培养的细胞中表达出能显著抑制大肠杆菌生长的抗菌肽PR39。(2)PR39基因在转基因小鼠的多个组织中都有表达,并能稳定遗传至后代。转PR39基因小鼠的生长速度显著高于同窝非转基因小鼠。(3)猪胸膜肺炎放线杆菌感染小鼠试验结果显示感染后5~24h,转基因小鼠组死亡率低于非转基因小鼠组,其中在9h、13h转基因小鼠组死亡率显著低于非转基因小鼠组,表明PR39可增强转基因小鼠的抗菌能力,延缓了其死亡时间,降低了其死亡率。(3)猪胸膜肺炎放线杆菌感染5h后存活转基因小鼠各组织细菌含量显著低于对照非转基因小鼠,且组织病理症状比对照小鼠轻微。(4)猪胸膜肺炎放线杆菌感染后在5-17h死亡的转基因小鼠各组织细菌含量显著高于对照小鼠,而组织病理症状较对照小鼠轻微,表明转PR39基因小鼠具有更强的细菌耐受力,需要更高剂量的细菌才能使其死亡。综上所述,本研究证明了转基因表达PR39可显著增强转基因小鼠对细菌的抵抗力,这为未来培育具有良好抗病性能的转PR39基因猪提供了科学依据。
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q789;S852

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本文编号：1154147