利用RNAi抑制cre1基因转录提高里氏木霉表达纤维素酶

发布时间：2017-11-08 10:08

  本文关键词：利用RNAi抑制cre1基因转录提高里氏木霉表达纤维素酶

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【摘要】：本研究采用RNA干扰技术(RNAi)对里氏木霉主要的转录抑制因子cre1基因的表达进行抑制,以期提高里氏木霉生产纤维素酶的能力。通过PCR,从里氏木霉的基因组中扩增得到cbh1启动子、反向的cre1基因片段(568~963 bp)、正向的cre1基因片段(655~961 bp)和cbh2终止子,利用DNA assembler方法将这些基因连接到pRS424质粒上,构建成p Cre1-i质粒。再将RNAi盒分作两个片段扩增,同时转化里氏木霉并通过PCR鉴定阳性转化子。摇瓶发酵显示其中一株转化子在纤维素诱导培养基中培养4.5 d后,其纤维素酶的滤纸酶活、内切葡聚糖酶活和CBHI酶活为0.67、3.70和0.46 U/m L,较出发菌株分别提高了1.3、1.8和5.6倍。通过实时荧光RT-PCR检测,发现该转化子中cre1基因的转录水平比出发菌株降低了43%。
【作者单位】： 山西大学生命科学学院;中国农业科学院饲料研究所;
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(31400067) 中国农业科学院青年英才计划
【分类号】：TQ920.1
【正文快照】： 纤维素酶作为自然界中数量最大的可再生资源,在制酒、酱油酿造、饮料加工等食品行业有广泛的应用价值[1]。目前,报道的主要产纤维素酶的菌株多为真菌[2]。其中,里氏木霉因其表达能力强(工业上,经改造后的里氏木霉,其产纤维素酶的产量可达到100 g/L以上[3])、易于培养和符合“

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1 陈士华;薛珍;姚金杰;吴兴泉;;里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ的生物信息学研究[J];河南工业大学学报(自然科学版);2008年04期

2 柳常青;许琳;欧阳嘉;董郑伟;严明;;不同碳源条件下里氏木霉纤维降解酶的蛋白组解析[J];南京林业大学学报(自然科学版);2009年01期

3 张晓p，

本文编号：1156685