新型GH5家族β-甘露聚糖酶的基因挖掘及表达鉴定

发布时间：2017-11-09 13:23

  本文关键词：新型GH5家族β-甘露聚糖酶的基因挖掘及表达鉴定

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【摘要】：为了获得性能优良的新型β-甘露聚糖酶,本研究采用基因挖掘技术从米曲霉(Aspergillus oryzae)RIB40基因组中挖掘到了2个假定的新型GH5家族β-甘露聚糖酶基因,分别命名为Aoman5A和Aoman5B。对这两条序列做了相关的生物信息学分析,同时借助p PIC9KM质粒将两个酶的成熟肽编码基因在Pichia pastoris GS115中实现了表达,并对表达产物进行了纯化和鉴定。生物信息学分析的结果表明Ao Man5A含有20个氨基酸残基的信号肽,而Ao Man5B含有21个氨基酸残基的信号肽和12个氨基酸残基的前导肽;序列比对的结果显示两个酶与目前已报道的序列最高的同源性分别为68%和79%,且Ao Man5A的N端还携带有一个1家族的CBM;三维结构预测的结果显示,两者均符合(α/β)8的TIM-桶状结构。表达鉴定的结果表明,在同样表达条件下,re Ao Man5A和re Ao Man5B上清液的酶活力分别为2.9、12.5 IU/m L;纯化后它们的酶比活力分别为8.3、104.2 IU/mg,前者的最适温度为35℃,而后者的最适温度为50℃,p H值特性的测定结果表明这两种酶均为酸性酶。硫酸-苯酚法测得re Ao Man5A和re Ao Man5B的糖含量分别为25.4%和12.6%,表明这两种重组酶均经过了糖基化修饰。本研究获得了两种新型的β-甘露聚糖酶,比较分析了它们的序列特征,并实现了它们的异源表达,为β-甘露聚糖酶的进一步研究及应用奠定了坚实的基础,也为其他新型酶的基因挖掘提供了可资借鉴的经验。
【作者单位】： 南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室;南阳师范学院生命科学与技术学院;蓬莱市市场监督管理局;
【基金】：国家自然科学基金青年科学基金项目(31401989) 河南省高等学校重点科研计划项目(15A416008)
【分类号】：Q55;Q78
【正文快照】： β-甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖的酶的总称,近年来研究较多的主要是β-1,4-内切甘露聚糖酶[1-2]。基于序列同源性及疏水簇分析,β-甘露聚糖酶可以被归为糖苷水解酶(glycoside hydrolase,GH)第5、26和113家族,而报道最多、研究最广的主要是GH5家族的β-甘露聚糖酶[3-4]。

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1162064