无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株

发布时间：2017-11-14 03:22

  本文关键词：无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株

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【摘要】：为验证一种基于定点突变的无痕基因敲除技术(Scarless deletion)在鼠伤寒沙门菌中的有效性,本研究以鼠伤寒沙门菌中的lux S基因为靶基因,利用-Red重组酶和重叠延伸PCR(SOE-PCR)引入定点突变,以AAA代替lux S基因的起始密码ATG,改变lux S基因编码序列,通过测序验证并采用2型自诱导物(AI-2)试验检测是否有信号分子产生。基因测序结果显示lux S基因的起始密码ATG被引入的AAA代替;AI-2试验未检测到突变基因菌株的AI-2产物,而对照的野生菌株有AI-2产生,表明突变基因失活,方法有效。利用无痕基因敲除技术构建突变株简单快速,并且不影响被突变基因的另一条DNA单链序列,具有广泛的应用前景。
【作者单位】： 新疆兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室;新疆塔里木大学生命科学学院;
【基金】：教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-11-1071) 新疆生产建设兵团“兵团英才”项目
【分类号】：S852.61
【正文快照】： 鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)是一种重要的病原菌,具有广泛的致病性,能够引起多种动物副伤寒,主要症状为胃肠炎或败血症,并可以引起人类的食物中毒。因此,研究鼠伤寒沙门菌的毒力基因功能可以有效制定防制策略。常规的基因敲除技术是利用同源重组以某种筛选标记(如抗

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本文编号：1183652