一株天鹅源小鹅瘟病毒的全基因序列分析及小鹅瘟病毒标准抗原抗体物质的制备

发布时间：2017-11-15 05:25

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【摘要】：1.一株天鹅源小鹅瘟病毒的全基因序列分析本研究利用鹅胚从江苏某动物园送检的病死天鹅病料中分离到一株小鹅瘟病毒,命名为GPV-XZ20150328,对该株病毒进行了全基因克隆测序,拼接后获得了GPV-XZ20150328的全基因序列。将其与GenBank上已发表的GPV全基因序列和本实验室分离的另一株天鹅源GPV全基因序列进行比较,结果显示：GPV-XZ20150328株全长为5106bp,与欧洲标准B株基因序列全长相同,同源性为97.7%,与天鹅源GPV-SHFX (5050bp)株的同源性达99.8%,但在末端重复序列其出现56个基因的插入,提示,GPV在不同个体和区域可能存在一定差异。2.小鹅瘟病毒标准抗原物质的制备本研究通过鹅胚接种扩增小鹅瘟病毒,用超速离心法进行纯化,通过SDS-PAGE分析、直接透射电镜观察、血凝试验、PCR特异性分析及灭活条件测定后,用聚乙二醇6000(PEG6000)浓缩法制得GPV浓缩抗原。结果表明,扩增的病毒纯度较高且无AIV、NDV、 EDS76、MDPV、ALV、MDV、IBV、ILTV、IBDV、REV、DEV、TMUV等病毒的污染。灭活条件以0.3%β-丙内酯作用48h最佳。制得的GPV浓缩抗原与特异性抗体反应的琼扩效价为1.4。将制备的浓缩抗原加入1%BSA冻存保护剂,分装,冻干后经物理性状检查、计算CV值、无菌检验、支原体检验、均一性、稳定性、保质期等检验后获得了高质量的标准抗原,可以用于相应检测试剂的质量判别。3.小鹅瘟病毒标准抗体物质的制备本研究采用口服和注射的途径对雏鹅进行四次免疫后制备了抗小鹅瘟多抗血清。利用本实验室保存的一株抗鹅细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株(GPV-Mab-6C8)经Bab/c小鼠制备出抗小鹅瘟单克隆抗体。用琼脂扩散试验检测,该多抗血清的AGP效价为1：64,用GPV细胞适应毒建立的免疫荧光检测方法(IFA)检测该血清,IFA效价为1：6400,单抗的IFA效价为1：1600。特异性鉴定结果表明制备的抗体物质只与GPV反应,而不与NDV、 AIV、EDS76、ALV、REV、IBV、IBDV、TMUV等病毒反应,证明特异性良好。将制备的抗体物质加入0.01%硫柳汞,分装,冻干后经物理性状检查、无菌检验、支原体检验、均一性、稳定性、保质期等检验后获得了高质量的标准抗体。
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65

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