小麦农杆菌介导转基因植株的稳定获得和检测

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5期　　　　　　　　　　　　　叶兴国等:小麦农杆菌介导转基因植株的稳定获得和检测　　　　　　　　　　　　　　473表3　不同小麦基因型转化效果及目的基因的整合情况

Table3　Transformationefficiencyofdifferentexperimentsorgenotypesandintegrationoftargetgeneintowheatgenomics试验编号基因型

Exp1GenotypeBobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Bobwhite

Jagger

扬麦158

　Yangmai158

10扬麦10号

　Yangmai10

123456789阳性植株Positiveplants263253400单拷贝整合植株Plantswithsinglecopyintegration142232300多拷贝整合植株Plantswithmultiplecopyintegration1210211转化效率Transformationefficiency(%)0173119801750157112501701100单拷贝整合率Percentageofsinglecopy(%)501006616766167100100601006616775100--　4　2180　50100　　　　龄10～25d株[15],2个月以上的胚性愈

伤组织获得了转基因植株,利用培养1～25d的幼胚

或愈伤组织没有获得转基因植株[16],而笔者利用预

培养4d的幼胚愈伤组织获得了转基因植株,利用

10～25d的胚性愈伤组织没有获得转基因植株。看

来,小麦外植体的生理状态对农杆菌侵染起着至关

重要的作用。事实上,产生胚性愈伤组织之前的幼胚

或小愈伤组织是比较理想的受体,被农杆菌感染和

转入外源DNA的细胞在选择培养基上存活,进而

产生胚性愈伤组织和再生植株,而胚性愈伤组织已

是一群分化了的细胞,各个器官已基本成形,在分化

培养基上3～5d即能产生绿芽。所以,笔者认为用这

样的愈伤组织作为受体难以转化成功。此外,农杆菌

转化小麦具有很强的基因型特异性,Cheng等仅以

[15]Bobwhite为受体基因型获得了转基因植株,我们

除了Bobwhite以外,也以扬麦10号为受体基因型

获得了转基因植株,拓宽了小麦农杆菌转化的受体

基因型。筛选优良的受体基因型是提高小麦农杆菌

介导转化效率的重要环节。

本研究首先利用npt??ELISA对抗性再生植

株进行鉴定,呈阳性反应的植株移栽,假阳性植株舍

弃,然后再利用PCR、Southernblot和叶片离体退

绿法对移栽的阳性植株进行鉴定,4种方法获得的

检测结果相互印证,非常一致。npt??ELISA检测不

但具有简单、快速、可靠等优点,而且能较早淘汰假

阳性植株,减轻移栽和分子检测的工作量。另外,npt

??ELISA测定值的高低与目的基因在染色体组上

整合的拷贝数有一定关系,单拷贝整合植株的

三拷贝整合植株。所以,如果表达ELISA值高于二、上具有npt??基因,不但可以利用ELISA法对转基因植株进行有效鉴定,而且还能判断外源DNA的整合拷贝。References:[1]　VasilV,SrivastavaV,CastilloAM,etal.Rapidproduc2tionoftransgenicwheatplantsbydirectbombardmentofcul2turedimmatureembryos[J].Bio??Technology,1993,11:1153-1158.[2]　WeeksJT,AndersonOD,BlechlAE.Rapidproductionofmultipleindependentlinesoffertiletransgenicwheat(TriticumaestivumL.)[J].PlantPhysiol.1993,102:1077-1084.[3]　ChengZM,HeXY,ChenCZ,etal.Barleyyellowdwarfviruscoatproteingeneandtransgenicwheatplantsobtainedbypollentubepathway[J].ProgressinNaturalScience(Se2riesB),1994,4(2):235-240.[4]　ZengJZ,WangDJ,WuYQ,etal.Transgenicplantsob2tainedwithpollen2tubepathwaymethod[J].ScienceinChina(SeriesB),1994,37(3):319-326.[5]　ZhangXD,LiDM,XuWY,etal.Developmentoftrans2genicwheatbybiolisticbombardmenttransferringBastare2sistancegeneandnovelHMWgluteninsubunitgenes[J].ActaAgricultureBoreali2Sinica,1997,(1):133-136.(inChinese)张哓东,李冬梅,徐文英,等.用基因枪将除草剂Basta抗性基因与小麦HMW谷蛋白亚基基因导入小麦获得转基因植株[J].华北农学报,1997,(1):133-136.[6]　BeckerD,BrettschnriderR,LorzH.Fertiletransgenicwheatfrommicrosprojectilebombardmentofscutellartissue[J].PlantJ.1994,5:299-307.[7]　BlechlAE,AndersonOD.Expressionofanovelhigh2molecular2weightgluteinsubunitgeneintransgenicwheat[J].NatureBiotechnology,1996,14(7):875-879.[8]　FredyA,VasilV,SrivastavaV,etal.Acceleratedproductionoftransgenicwheat(TriticumaestivumL.)plants[J].PlantCellReports,1996,16:12-17.[

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474　　　　　　　　　　　　　　　中　国　农　业　科　学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　34卷

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