葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质

发布时间：2017-11-19 05:05

  本文关键词：葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质

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【摘要】：【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设计引物,PCR扩增得到基因s16942和s331,连接到载体pGm上,并转化到黑曲霉中,获得的转化子经过amdS二筛平板复筛,测序验证,得到高效表达此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331。【结果】SDS-PAGE检测结果显示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa,且阴性对照中没有此条带。粗酶液的酶学性质表明,G1-p Gm-s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达521 U/mL;G1-p Gm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达84 U/mL。【结论】本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达,并且具有较高的活性。
【作者单位】： 天津科技大学生物工程学院;中国科学院天津工业生物技术研究所;
【基金】：天津市科技计划项目(14ZCZDSY00065)~~
【分类号】：Q78;Q936
【正文快照】： β-甘露聚糖酶(β-mannanase EC 3.2.1.78)是一类能够水解含有甘露糖苷键的甘露聚糖(包括葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖等异甘露聚糖)的半纤维素内切水解酶,以内切方式降解β-D-1,4-吡喃甘露糖苷键,降解产物的非还原末端为甘露糖[1],其主要水解产物为单糖、二糖、三糖、四糖等低聚

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3 朱R，

本文编号：1202384