人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究

发布时间：2017-11-19 05:15

  本文关键词：人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究

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【摘要】：为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库。经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9 M。通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位。通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室;
【基金】：重大新药创制“应急抗体药物研发技术平台”(2013ZX09304103001006)
【分类号】：R373.9
【正文快照】： 狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus,RV)引起的急性传染病[1],狂犬病毒基因组编码5种主要蛋白(L、N、G、M1和M2),其中糖蛋白(G)是病毒与宿主细胞结合的配体,能诱导机体产生中和抗体,主要有I、II和III号中和性抗原位点[2]。根据世界卫生组织(WHO)推荐的处理原则,III级暴

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本文编号：1202428