高表达NDRG2基因对人肝癌细胞HepG2 EMT的影响

发布时间：2017-11-19 06:17

本文关键词：高表达NDRG2基因对人肝癌细胞HepG2 EMT的影响

【摘要】：目的:观察高表达NDRG2基因对人肝癌Hep G2细胞EMT(epithelial mesenchymal transition,上皮间充质转化)的影响,并探讨其机制是否与抑制Stat3/Twist信号通路轴相关。方法:(1)以HepG2为研究对象,根据既往文献资料用100ng/mL浓度的EGF(人表皮生长因子)处理HepG2细胞;利用光学倒置显微镜观察细胞形态,证实EGF确实能够成功诱导肝癌细胞发生EMT;(2)构建PEGFP-NDRG2及PEGFP-C2对应空载体;(3)用PEGFP-NDRG2及PEGFP-C2空载体分别转染人肝癌细胞,并通过倒置荧光显微镜、RT-PCR及Western-bolt检测是否转染成功;(4)该实验分为四组:PEGFP-NDRG2、PEGFP-C2、转染试剂组及空白组。转染后各组均加入EGF持续刺激细胞36小时,Western-Blot方法检测各组P-Stat3蛋白表达情况变化;(5)RT-PCR方法检测转染各组Stat3、Twist、E-Cadherin mRNA表达情况变化。结果:(1)用EGF处理HepG2细胞:用100ng/mL浓度的EGF处理HepG2细胞24小时后在倒置荧光显微镜下观察细胞,细胞出现明显的形态学改变,出现上皮间充质转化,发生EMT现象。(2)成功构建PEGFP-NDRG2载体及对应空载体PEGFP-C2并成功转染人肝癌细胞。构建载体后测序结果证实成功构建,用PEGFP-NDRG2质粒及空白质粒分别转染HepG2细胞后,倒置荧光显微镜下观察细胞,显示绿色荧光显示成功转染了Hep G2细胞,计算转染率大于70%。RT-PCR方法及Western-blot实验均显示转染PEGFP-NDRG2载体后细胞中NDRG2 mRNA与蛋白表达水平均较空白质粒组及转染试剂组上调,差异有统计学意义(P0.05)证明转染及构建载体成功。而转染空白质粒组与空白组相比,NDRG2的mRNA水平及蛋白表达水平均无统计学差异(P0.05)。(3)转染PEGFP-NDRG2载体对Stat3/Twist/E-Cadherin信号通路的影响。转染成功后4组均加入EGF处理36小时,用RT-PCR方法检测各组Stat3、Twist及E-Cadherin mRNA水平变化。RT-PCR显示4组之间Stat3mRNA水平无明显改变,转染NDRG2基因组较其余3组Twist mRNA水平下降,而E-Cadherin mRNA水平高于其余3组。Western-bolt显示PEGFP-NDRG2转染组P-stat3蛋白表达水平低于其余3组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:(1)高表达NDRG2基因可以抑制肝癌细胞EMT现象发生;(2)高表达NDRG2基因抑制肝癌细胞EMT现象可能是通过抑制Stat3/Twist信号通路轴发挥作用。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

【参考文献】

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