大豆干旱胁迫下miRNA与mRNA荧光定量PCR内参基因的筛选

发布时间：2017-11-23 09:06

  本文关键词：大豆干旱胁迫下miRNA与mRNA荧光定量PCR内参基因的筛选

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【摘要】：【目的】通过分析大豆中候选内参基因的稳定性,筛选大豆干旱胁迫处理条件下适合成熟miRNA、前体miRNA及靶基因mRNA荧光定量PCR的内参基因。【方法】以干旱胁迫处理后的大豆根和叶片为材料,选择了5个成熟miRNAs和5个传统的看家基因作为候选内参基因,利用GeNorm和NormFinder程序对10个候选内参基因的稳定性进行评价。【结果】在干旱胁迫下,大豆根、叶片中,成熟miRNA定量最合适的单个内参基因分别为miR156a、miR167a,最合适的内参基因组合分别为miR1520d与miR156a、miR1520d与miR167a。前体miRNA和靶基因mRNA定量最合适的单个内参基因分别为Fbox、Act11,最合适的内参基因组合分别为Act11与Fbox、Act11与EF1A。【结论】筛选出大豆干旱胁迫条件下成熟miRNA、前体miRNA及其对应靶基因mRNA的荧光定量PCR的内参基因,最稳定内参基因数目为2个。
【作者单位】： 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心;吉林农业大学生命科学学院;东北师范大学附属中学;
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08010-002) 国家自然科学基金项目(31271746;31201144) 吉林省发改委项目(JF2012C002-04)
【分类号】：S565.1
【正文快照】： 实时荧光定量PCR(qPCR)因其灵敏度高、成本较低、高通量及方便快捷等优点,已成为样本中基因表达定性与定量的常规方法之一。在qPCR检测基因表达变化过程中,选择适当的内参基因进行标准化,以减少检测样本间的cDNA差异是必须的[1]。理想的内参基因应该在不同试验条件、不同时间

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