含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节

发布时间：2017-11-25 08:16

  本文关键词：含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节

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【摘要】：目的:构建含人雌激素受体β(ERβ)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并探究阿司匹林诱生的脂氧素(LXA_4)对其转录活性的影响。方法:以子宫内膜间质细胞基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增ERβ启动子序列,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建pGL3-basic-ERβ报告基因载体,行双酶切及测序鉴定后将上述载体与pCMX-βgal载体共转染293T细胞24小时后,加入不同浓度(0.1、1、10、100 nmol/L)的LXA_4刺激24小时,然后裂解细胞检测荧光素酶的活性。结果:测序结果表明,构建的pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体序列正确;在293T细胞中,构建的pGL3-basic-ERβ报告基因载体与空载体pGL3-basic相比,pGL3-basic-ERβ报告基因载体的转录活性提高了将近十倍;荧光素酶报告系统表明,LXA4浓度为0.1、1、10、100 nmol/L时其相对荧光强度与对照组比较明显升高(P0.05),10 nmol/L浓度的相对荧光强度明显高于其他浓度(P0.05)。结论:成功构建了pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体,并证明在一定浓度LXA_4的刺激下ERβ启动子区域转录活性升高,LXA_4浓度为10 nmol/L时转录活性达最高值。
【作者单位】： 厦门大学附属第一医院;厦门大学生命科学院细胞应激生物学国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(编号:81571418) 福建省卫生系统中青年骨干人才培养基金(编号:2014-ZQN-ZD-31)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 雌激素效应的发挥均主要依赖雌激素受体(estro-gen receptor,ER),ER属于核受体超家族中甾体受体中的一员,是受配体调节的转录因子,与其他的核受体具有相似的结构。其有两种亚型:雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ),它们是不同基因的产物,结构和功能均不同。ERβ是第2种被

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本文编号：1225351