QDPR基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞的氧化应激影响

发布时间：2017-11-26 06:20

  本文关键词：QDPR基因表达变化对高糖环境下NRK-52E细胞的氧化应激影响

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【摘要】：目的通过检测高糖环境下各组细胞模型超氧阴离子(superoxide anion,O2-)及超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)的含量变化,探讨醌型二氢生物喋呤还原酶(Quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)表达变化对高糖环境下肾小管上皮细胞系NRK-52E细胞的氧化应激影响。方法用本实验室制备的慢病毒构建过表达QDPR基因、空载过表达病毒对照、敲低QDPR基因及敲低随机序列病毒的NRK-52E细胞模型,分别给予NRK-52E细胞及制备好各组的细胞模型5.4mmol/L及30mmol/L的葡萄糖培养基,以模拟正常糖环境和高糖环境,并将所有细胞进行以下分组:(1)NRK-52E对照组(NC组)(2)NRK-52E高糖对照组(NHG组)(3)空载过表达病毒对照组(LV-OCON组)(4)空载过表达病毒高糖对照组(LV-OCON-HG组)(5)QDPR基因过表达组(LVQDPR组)(6)QDPR基因过表达高糖组(LV-QDPR-HG组)(7)敲低随机序列对照组(LV-SHCON组)(8)敲低随机序列对照高糖组(LV-SHCON-HG组)(9)敲低QDPR基因组(LV-SHQDPR组)(10)敲低QDPR基因高糖组(LV-SHQDPR-HG组)。利用流式细胞术dihydroethidium方法检测各组细胞O2-含量。用Western blot法检测SOD1在各组表达水平。结果1高糖环境下NRK-52E细胞处于氧化应激状态。NRK-52E细胞高糖NHG组与正常葡萄糖对照NC组相比O2-含量增加(P0.05);SOD1表达下降(P0.05)。2利用慢病毒技术成功地构建了过表达QDPR基因的NRK-52E细胞模型。高糖环境下,过表达QDPR基因的LV-QDPR-HG组与空载对照LV-OCONHG组相比细胞O2-含量降低(P0.001),SOD1表达下调(P0.01)。3利用慢病毒技术成功地构建了敲低QDPR基因的NRK-52E细胞模型。高糖环境下,敲低QDPR基因的LV-SHQDPR-HG组与随机序列对照组LV-SHCON-HG相比O2-含量升高(P0.05),SOD1表达无明显变化(P0.05)。结论1 QDPR基因通过影响氧化应激而影响糖尿病肾病的发生和发展。2在高糖环境下,过表达QDPR基因能够降低NRK-52E细胞的氧化应激。3在高糖环境下,敲低QDPR基因能够增加NRK-52E细胞的氧化应激。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2

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