藤茶类黄酮合成相关基因的克隆与表达分析

发布时间：2017-12-02 09:20

  本文关键词：藤茶类黄酮合成相关基因的克隆与表达分析

  更多相关文章： 藤茶 二氢杨梅素 基因表达 荧光定量 相关性

【摘要】：藤茶(Ampelopsis grossedentata W.T.Wang),系葡萄科蛇葡萄属的藤本植物,其茎叶富含二氢杨梅素(dihydromyricetin, DMY)等黄酮类化合物,可以加工成保健茶,具有清热解毒、消炎、抗氧化、保肝护肝和增强免疫力等多种功效。本文从藤茶中克隆了5个类黄酮合成相关基因,并对适于实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术的内参基因进行筛选。然后分析了类黄酮合成相关基因在藤茶叶片不同发育时期、不同器官组织中的表达水平及其与DMY含量的相关性,以期为阐明藤茶DMY高含量形成的分子机理提供基础信息。主要结果如下：1、检测了Actin、18s-rRNA、GAPDH, a-tubulin、β-tubulin和UBQ等6个常见管家基因在藤茶中的表达情况,并使用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件进行数据分析。结果表明,当比较不同器官组织的基因表达时,Actin、 18s-rRNA和GAPDH的稳定性较好；当比较叶片不同发育时期的基因表达时,18s-rRNA、GAPDH和α-Tubulin的稳定性较好。综合考虑,本文选取18s-rRNA作为内参基因。2、采用同源克隆技术,从藤茶叶片中克隆了5个类黄酮合成相关基因：AgPAL、AgC4H、Ag4CL、AgCHS和AgCHI,其开放阅读框长度分别为2133bp、 1518bp、1713bp、1182bp和717bp,经NCBI数据库BLAST分析,这5个基因推导的氨基酸序列与葡萄、白桦、金银花和柑橘等其他物种具有较高的同源性(77%-96%)。3、qRT-RCR结果表明,在藤茶叶片不同发育时期,AgPAL、AgC4H、Ag4CL、 AgF3H的表达量在前三叶中随着叶片的成熟度增加而下降,第四叶中表达量上升；AgF3'H的表达量第一叶和第二叶的表达量呈现递减的状态,第三叶和第四叶的表达量呈现增加；AgCHS、AgF3'5'H的表达量均为第一叶最高,第二叶到第四叶的表达量并无明显变化；而AgCHI、AgDFR和的表达量从第一叶到第四叶没有明显变化。对于不同器官,AgPAL和AgDFR在幼根中表达量最高,其次是叶和嫩茎；Ag4CL、AgCHS和AgF3'5'H在幼根和嫩茎中基本不表达,只有在叶片中表达；AgC4H、AgCHI、AgF3H和AgF3'H在叶片中表达量最高,其次是幼根,在嫩茎中表达量最低。4、利用HPLC技术,测定了藤茶不同时期、不同器官中的DMY含量,结果表明,在叶片不同发育时期,DMY含量随着叶片的成熟度增加而下降,即第一叶第二叶第三叶第四叶。而对于不同组织器官中,DMY在幼根中基本不含有,而在叶中含量最高,嫩茎中含量次之。5、对藤茶叶片不同发育时期和不同组织器官中的DMY含量与类黄酮合成基因的表达量进行相关性分析。结果表明,对于叶片不同发育时期：AgPAL、 AgC4H、Ag4CL、AgCHS、AgF3H、和AgF3'5'H的基因表达量越高,其DMY含量越高,与DMY关系较大；对于不同器官,随着AgPAL和AgDFR表达量增高,DMY含量在降低,因此,AgPAL和AgDFR的表达对于不同器官中的DMY呈负调控。
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1244411