利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

发布时间：2017-12-02 19:23

本文关键词：利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究

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【摘要】：为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育,本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38%,其中32个为插入突变,6个为缺失突变。插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4%。本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38%,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性。
【作者单位】：黑龙江省农业科学院畜牧研究所;
【基金】：哈尔滨市科技局项目(2013RFQYJ037)
【分类号】：S828
【正文快照】： CRISPR-Cas9系统(Clustered regularly inter-spaced short palindromic repeats)是目前被广泛关注的一种基因编辑系统。与锌指核酸内切酶(Zincfinger endonuclease,ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nucle-ase,TALEN)等打靶技术相比,

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