鲤鱼RORγ和STAT3基因的克隆及对Th17细胞免疫功能影响

发布时间：2017-12-07 15:11

  本文关键词：鲤鱼RORγ和STAT3基因的克隆及对Th17细胞免疫功能影响

  更多相关文章： 鲤鱼 Th17相关细胞因子 STAT3 RORγ IL-17AF2 基因克隆

【摘要】：辅助性T细胞是组成型表达TCRαβ和CD4分子的T细胞,根据CD4+T细胞在受到病原刺激的情况所分泌的细胞因子不同将其分为Ⅰ型辅助性T细胞(Th1)、Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)和Th17细胞。其中Th17细胞的名字来源就在于它能够主要产生IL-17(IL-17A和IL-17F),由它分化而来的天然免疫组分会在适应性免疫与天然免疫共同对抗炎症反应构建的第一道防线中起作用,而它大多数功能都是由其分泌物,即IL-17所决定的。Th17的作用包括招募中性粒细胞、激活天然免疫细胞、增强B细胞功能、释放促炎性细胞因子如TNF和IL-1β等。另外IL-17信号通路还可以促进细胞因子和其他炎症因子,如胞间粘附分子、抗菌肽和金属蛋白酶的分泌,从而维持正常的机体环境,避免组织损伤。Th17细胞可由IL-6,TGF-β,IL-21和IL-23共同诱导分化成为成熟Th17细胞,这过程还依赖信号传导与转录活化因子STAT3的激活。另外视黄酸相关孤儿受体RORγ和RORα也能够作为转录因子参与Th17细胞的分化,而RORγ的转录活性同时又受到STAT3的调控。目前在硬骨鱼中,只有斑马鱼和草鱼的ROR基因被鉴定出来,包括RORα1,RORα2,RORβ,RORγ1和RORγ2,并且人们在斑马鱼胚胎发育过程中对这几个基因的表达情况进行了检测,但对其免疫调控方式和鱼类中的免疫学功能并未有研究。而STAT3在硬骨鱼中虽研究相对较多,但在鲤鱼中STAT3基因克隆与功能研究并无相关报道。本论文以鲤鱼为研究模型,首先根据STAT3和RORγ的保守区设计多对引物克隆得到部分片段并将其进行拼接,首次得到了总长度为2157bp的STAT3基因完整ORF(开放阅读框)和长度为732bp的RORγ基因编码片段。用SMART软件进行蛋白预测分析,确定STAT3含有一个STAT-int(2-122)结构域及一个SH2特征性结构域(583-664),同时还有两个螺旋结构域(136-223,268-292)。鲤鱼RORγ基因的732bp核苷酸编码243个氨基酸,其中在46-202之间构成了HOLI结构域。我们对该序列与多物种进行比对构建系统进化树,发现鲤鱼与草鱼的RORγ基因处于同一分支,相似性为85%,而STAT3的亲缘关系与斑马鱼最为接近。为进一步研究Th17细胞所分泌细胞因子的免疫功能,我们选取了鲤鱼IL-17AF2基因作为Th17细胞的功能代表性细胞因子,克隆得到其部分片段后并通过荧光定量PCR分析其组织分布。结果发现IL-17AF2在头肾中表达量最高,肝脏次之,其次为脾脏、皮肤、前肠、后肠和鳃。为研究病毒感染后鲤鱼免疫系统中IL-17AF2的表达变化,我们用PolyI:C注射刺激鲤鱼,同时队体外鲤鱼头肾白细胞进行刺激,分别在不同的时间段运用Real-time PCR检测其mRNA水平,结果显示鲤鱼IL-17AF2基因的表达量均被上调,其中在头肾和皮肤中含量升高最明显,而在鳃中的升高变化量较小。其中在IL-17AF2基因表达上调最明显的组织和时间段内,STAT3和RORγ的含量均有相应的升高。综上检测结果说明IL-17AF2与鲤鱼的抗病毒免疫反应有关,而Th17的功能发挥很可能与STAT3和RORγ相关。
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S943

【相似文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 卞芳芳;王军;路明;武怡;;RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织表达及布地奈德对其抑制作用[A];2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 常强;鲤鱼RORγ和STAT3基因的克隆及对Th17细胞免疫功能影响[D];山东师范大学;2016年

2 陈春勤;基于RoR的水库移民后期扶持评估系统的开发[D];江西农业大学;2013年

3 陆鸿燕;山羊Hr基因和RORα基因的克隆及序列分析[D];内蒙古农业大学;2010年

4 卢骁;支持敏捷化开发的移动ROR框架的构建[D];复旦大学;2011年

，

本文编号：1262804