藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建

发布时间：2017-12-11 11:35

  本文关键词：藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建

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【摘要】：【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS~(TM)载体,大肠杆菌EP1300~(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的三级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。
【作者单位】： 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31170085) 国家“973项目”(2012CB721004)~~
【分类号】：Q933
【正文快照】： 藤黄生孢链霉菌(Streptomyces luteosporeus似的结构(如图1-A),可以通过细菌的芳香族化合NRRL 2401)于1990年由德国科学家Dagmar Witt和物摄取机制进入细菌体内[4],作为色氨酸的一种Erko Stackebrandt发现,它可以产生具有良好生物竞争性抑制剂,抑制色氨酸t RNA的合成[5 8]。

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本文编号：1278325