绿色荧光蛋白为报导基因快速筛选重组羊痘病毒表达载体

发布时间：2017-12-21 07:06

  本文关键词：绿色荧光蛋白为报导基因快速筛选重组羊痘病毒表达载体　出处：《南方医科大学学报》2016年01期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的利用绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因,构建通用、高度减毒的外源基因表达载体IA82△121-V。方法抽提病毒DNA,扩增ORFV132左右同源臂,构建穿梭质粒p SPV-132LF-EGFP-132RF;转染OFTu细胞,与羊痘病毒IA82△121同源重组,通过荧光信号筛选重组体IA82△121-V,PCR及测序鉴定,并经病毒滴定、体外血管内皮细胞增殖实验以检测ORFV132缺失后的功能变化。结果成功快速筛选出重组羊痘病毒IA82△121-V,初步判断ORFV132的缺失不影响病毒体外的生长复制功能,但是减轻了其毒力。结论利用G FP为报导基因能简单、快速、稳定地筛选出重组羊痘病毒,高度减毒的重组羊痘病毒IA82△121-V有望成为新一代外源基因表达载体。
【作者单位】： 南方医科大学珠江医院检验医学部;
【基金】：国家自然科学基金(81441066) 广东省自然科学基金(S2013010014850)~~
【分类号】：R446.5
【正文快照】： 羊痘病毒(Orf virus,ORFV)是一种亲上皮的副痘病毒,其宿主范围窄,仅限于绵羊和山羊,主要感染皮肤黏膜区域,不会引起全身性病毒播散[1]。羊痘病毒IA82(OV-IA82)为1982年爱荷华洲爆发的羊痘疮疾病中分离所得[2],其132基因(ORFV132)表达血管内皮生长因子(VEGF)[3],可以与血管内皮

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本文编号：1315147